Se diseñaron nuevas secuencias de cebadores y la PCR semianidada fue capaz de detectar un mayor número de especies de Candida mediante el uso de temperaturas de recocido de 60°C o 65°C en la segunda ronda de la PCR semianidada.

En la Universiti Putra Malaysia (Serdang, Selangor, Malasia) los científicos diseñaron cebadores inversos, específicos para las especies (SSRP) de 10 especies de Candida mediante la recuperación de, al menos, tres secuencias de genes espaciadores transcritos internos (ITS), de cada especie. La amplificación de ADN fue realizada en un termociclador de gradiente, MasterCycler. Para probar la especificidad del método, se analizaron 27 aislamientos clínicos de Candida, 10 cepas de Candida de la Colección de Tipos Americana (ATCC, Manassas, VA, EUA), seis cepas de Aspergillus ATCC, un aislado clínico de Cryptococcus neoformans y un ADN genómico humano de un voluntario humano aparentemente sano.

Después de optimizar las condiciones de PCR en el termociclador MasterCycler (Eppendorf, Hamburgo, Alemania), las 10 especies objetivo de Candida mostraron un tamaño aproximado de amplicones PCR esperados, después de la segunda ronda de PCR, con sus respectivos SSRP. Una observación similar fue observada cuando se probaron los 27 aislados clínicos de Candida de diversas especies en las pruebas de especificidad analítica. El límite de detección para todas las especies de Candida osciló entre 0,26 pg a 0,46 pg, a excepción de Candida guilliermondii y Candida kefyr donde se requirió un aumento de 10 veces en la cantidad de ADN.

Los autores concluyeron que las ventajas de la función de alta sensibilidad de la PCR semianidada fueron aplicadas, con éxito, mientras que la desventaja enfrentada por lo general, sobre todo en la capacidad limitada de detectar más especies, fue superada. Su uso es favorable en los tipos invasivos de casos de infección por hongos ya que se puede hacer la detección temprana rápida. Esto ayuda a disminuir la tasa de aparición de resistencia a fármacos y el uso precario de los fármacos antimicóticos costosos o tóxicos para la profilaxis y el tratamiento. El estudio fue publicado el 10 de diciembre de 2011, en la revista Diagnostic Microbiology and Infectious Disease.

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Universiti Putra Malaysia

American Type Culture Collection

Eppendorf