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Prueba molecular en orina identifica mutaciones del carcinoma pulmonar

Por el equipo editorial de LabMedica en español
Actualizado el 23 Jun 2015
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Imagen A: sistema de reacción en cadena de polimerasa digital (PCR) por gotitas (Fotografía cortesía de Bio-Rad).
Imagen A: sistema de reacción en cadena de polimerasa digital (PCR) por gotitas (Fotografía cortesía de Bio-Rad).
Imagen B: El secuenciador de mesa MiSeq (Foto cortesía de Konrad Förstner).
Imagen B: El secuenciador de mesa MiSeq (Foto cortesía de Konrad Förstner).
La monitorización del ADN tumoral circulante (ctADN) es una técnica prometedora que les puede proporcionar a los médicos con una forma más rápida, más barata y menos invasiva para evaluar el estado clínico y la respuesta a la terapia de pacientes con cáncer.

La progresión de la enfermedad en pacientes con cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC) metastásico, es anunciado, a menudo, por la adquisición de la mutación de resistencia al receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) T790M, después del tratamiento con inhibidores anti-EGFR.

Los científicos en el Centro del Cáncer Moores (La Jolla, CA, EUA) tomaron muestras de orina de pacientes con NSCLC metastásico que progresaron con el tratamiento de erlotinib y extrajeron el ctADN mediante un método que aísla preferentemente el ctADN, corto, fragmentado. Se usó un sistema de reacción en cadena de la polimerasa digital por gotitas (Bio-Rad; Hércules, CA, EUA) para cuantificar el ctADN, el cual produjo un promedio de ctADN amplificable total por muestra de 0,4 µg (rango, 0,04 µg hasta 2,4 µg ). Se usaron líneas celulares adicionadas para la caracterización analítica y se demostró que el ensayo de EGFR T790M tenía un límite de detección inferior de dos copias incluidas en una línea de base de 60 ng de ADN de tipo salvaje, produciendo una sensibilidad analítica de 0,01%. El estado de EGFR fue analizado mediante un método de PCR que amplifica fragmentos de ADN diana, cortos, utilizando condiciones de unión cinéticamente-favorables para el bloqueo de un oligonucleótido de tipo salvaje, seguida por la secuenciación masivamente paralela profunda, usando un secuenciador de mesa, MiSeq (Illumina, San Diego CA, EUA).

La mutación de EGFR T790M en la orina fue detectada en 15 de 22 (68%) de los pacientes que recibieron tratamiento anti-EGFR hasta la progresión. La mutación urinaria de EGFR T790M fue detectada en 10 de 10 pacientes positivos en el tejido, dando el 100% de concordancia. Las pruebas para ctADN en la orina identificó cinco pacientes adicionales que pueden ser elegibles para el tratamiento con medicamentos anti-T790M, tres de los cuales eran negativos en el tejido. Los investigadores demostraron que la mutación EGFR T790M se puede detectar en el ctADN urinario hasta tres meses antes de la progresión radiográfica de inhibidor de la tirosina quinasa (TKI) anti-EGFR de primera línea. Cuando los pacientes positivos T790M fueron tratados con TKIs anti-EGFR de tercera generación, se observó, una disminución de la carga de ctADN T790M con apenas cuatro horas después de la terapia en el primer día de tratamiento. La disminución inicial en la T790M urinaria fue seguida por un aumento en T790M durante la primera semana de tratamiento.

Hatim Husain, MD, autor principal del estudio y sus colegas llegaron a la conclusión de que este ensayo de ctADN para múltiples genes a través de la secuenciación de próxima generación (NGS) podría convertirse en una “biopsia líquida” que podría servir como una alternativa a la biopsia de tejido invasiva. La mutación EGFR T790M en la orina fue detectada meses antes de la detección radiográfica, y además, las pruebas de ctADN en la orina identificaron pacientes negativos en los tejidos que pueden ser elegibles para el tratamiento con TKIs anti-EGFR de tercera generación y la monitorización de la dinámica urinaria de T790M puede predecir el beneficio clínico o la carga tumoral inicial. El estudio fue presentado en el Congreso de Cáncer de Pulmón EUROPEO celebrado entre el 15 y el 18 de abril de 2015, en Ginebra (Suiza).

Enlaces relacionados:

Moores Cancer Center
Bio-Rad
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