El análisis usa la amplificación de la región de repetición de trinucleótidos del retardo mental, con X frágil (FMR1), seguida por un análisis de hibridización para cuantificar el número de repeticiones en los amplicones.

Los científicos que trabajan en el Diagnóstico Molecular en PerkinElmer Health Sciences (Waltham, MA, EUA) han desarrollado el primer análisis de recuento de repeticiones que utiliza señales fluorescentes en lugar de espectrometría de masas o electroforesis como el mecanismo de señalización. También desarrollaron una prueba sencilla refleja de electroforesis de microfluidos que utiliza los mismos amplicones y reduce la necesidad de Southern blot, para diferenciar las muestras de mujeres homocigotas normales, de las de mujeres con mutaciones completas.

El ensayo fue probado en el ADN de 1.008 muestras de sangre seca de mujeres embarazadas en su primer trimestre. Las pruebas reflejas fueron realizadas en el 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies, Santa Clara, California, EUA), una plataforma compacta de electroforesis capilar de microfluidos, que utiliza el kit Agilent Technologies DNA 7500. Antes de la electroforesis, los productos de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) fueron purificados, primero, usando el kit PureLink PCR (Invitrogen, Grand Island, NY, EUA).

El ensayo de hibridación identificó 51 de ellos como alelos potencialmente expandidos igual o superiores a 45 repeticiones o como un intermedio o superior en la clasificación de repeticiones FMR1. De estas muestras, con resultado positivo, ocho fueron confirmadas por electroforesis de microfluidos como premutaciones con un número igual, o superior, a 55 repeticiones. Los resultados del ensayo de hibridación de la PCR se obtienen en menos de ocho horas, y la electroforesis de confirmación de los resultados positivos toma aproximadamente dos horas adicionales. Todas las manipulaciones de la PCR y el ensayo de hibridación se llevan a cabo en microplacas y se pueden realizar con una pipeta multicanal de alto rendimiento, con la perspectiva de una automatización sencilla.

El sistema de suspensión de arrays, Luminex 200 (Austin, TX, EUA), lee los resultados de fluorescencia de la prueba de hibridación sin necesidad de operario. Las proporciones de las señales fluorescentes indicativas de la longitud de las repeticiones son fáciles de calcular e incorporar en el software, y no se necesitan interpretaciones visuales de los electroferogramas para aproximadamente el 95% de las muestras que dan resultados negativos en la mayoría de los métodos de detección. Los autores concluyeron que sus resultados preliminares sugieren que el ensayo es un candidato razonable para la detección del estado de premutación, sí o no, en muestras maternas. Con una validación clínica adecuada, este ensayo permitirá el cribado de alto rendimiento, bajo costo y baja inversión. El estudio fue publicado en noviembre de 2011, en la revista Journal of Molecular Diagnostics.

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