Prueba molecular identifica rechazo agudo al trasplante

El desarrollo de análisis moleculares no invasivos para mejorar el diagnóstico y el seguimiento de las enfermedades de los pacientes es una necesidad crítica para los trasplantes renales, dado que el rechazo agudo (RA) aumenta el riesgo de daño crónico.

El rechazo agudo después del trasplante renal se produce en aproximadamente 15% a 20% de los pacientes a pesar de la terapia inmunosupresora y el rechazo por lo general es anunciado por un aumento de la creatinina sérica en el paciente, que es un marcador de la función renal, y luego se realiza una biopsia renal para confirmar si el rechazo está sucediendo.

Científicos de la Universidad de California (San Francisco, CA, EUA) quienes trabajaron con un equipo internacional utilizaron 558 muestras de sangre periférica (SP) de 438 pacientes adultos y pediátricos con trasplante renal, de ocho centros de trasplantes renales en los Estados Unidos, México y España y los inscribieron entre los años 2005 y 2012 para desarrollar una prueba de reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real (qPCR). Ellos desarrollaron la prueba en 143 muestras de adultos con y sin rechazo agudo determinado por biopsia renal, y luego finalizaron y validaron la prueba en tres cohortes de pacientes.

El ácido ribonucleico (ARN) total fue extraído usando kits que usan un método basado en columnas y fue medido para determinar la integridad del ARN usando el Kit Nano LabChip RNA 6000 en un Bioanalizador 2100 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, EUA). La qPCR por microfluidos fue realizada en el array dinámico 96.96 y el chip fue cargado a través del controlador HX IFC; la qPCR fue realizada en la plataforma BioMark qPCR (Fluidigm; Sur de San Francisco, CA, EUA,.

El equipo evaluó la expresión diferencial de 10 de los 43 genes, seleccionando los mismos diez genes que habían sido validados como diagnóstico para el RA en la SP a través de protocolos de recopilación y procesamiento de muestras de ensayos clínicos estandarizados. Para mejorar la exactitud diagnóstica para el RA en las 143 muestras de adultos, se utilizaron diversos métodos de modelización estadística para incluir otros siete genes que mejoraron la exactitud del panel de genes para discriminar el RA a partir de muestras de No-RA, para la selección final de 17 genes. El ensayo fue llamado kSORT y fue capaz de clasificar a los pacientes como de alto riesgo frente al bajo riesgo de RA. El ensayo kSORT fue capaz de detectar el RA en la sangre independientemente de la edad, el tiempo post-trasplante y la fuente de la muestra, sin la necesidad de la normalización adicional de datos.

Los autores concluyeron que el ensayo kSORT es un análisis de sangre simple, robusto y aplicable clínicamente. Ellos están utilizando kSORT en un ensayo prospectivo observacional, así como en un segundo ensayo prospectivo, aleatorizado, doble ciego, de intervención clínica, que establecerá cómo kSORT se puede utilizar en serie después del trasplante para complementar las guías de práctica clínica actuales para la estratificación del riesgo inmunológico del paciente, la carga de la medicación, y el requisito para la biopsia. El estudio fue publicado el 11 de noviembre de 2014, en la revista Public Library of Science Medicine.

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University of California

Agilent Technologies

Fluidigm