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Expresión de CD200 marca las células madre leucémicas en la LMA humana

Por el equipo editorial de LabMedica en español
Actualizado el 17 Nov 2020
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Imagen: El sistema 5200 Fragment Analyzer, realiza el control de calidad del ADN y el control de calidad del ARN para una amplia gama de muestras, entre las que se incluyen ADNg, ARN pequeño, ADNcf, fragmentos de ADN grandes y ARN total (Fotografía cortesía de Agilent Technologies).
Imagen: El sistema 5200 Fragment Analyzer, realiza el control de calidad del ADN y el control de calidad del ARN para una amplia gama de muestras, entre las que se incluyen ADNg, ARN pequeño, ADNcf, fragmentos de ADN grandes y ARN total (Fotografía cortesía de Agilent Technologies).
La leucemia mieloide aguda (LMA) se organiza como una jerarquía sostenida por una población menor de células madre de leucemia (LSC, por sus siglas en inglés) con capacidad de autorrenovación que promueven la enfermedad. Las poblaciones de LSC en la LMA exhiben heterogeneidad fenotípica, genética y funcional, lo que contribuye al fracaso de la terapia y la recaída.

El progreso hacia la comprensión de la base mecanicista de la resistencia a la terapia en las LSC se ha visto obstaculizado por las dificultades para aislar las fracciones celulares que enriquecen a toda la población heterogénea de LSC dentro de las muestras individuales de la LMA. En consecuencia, es fundamental estudiar las propiedades de todas las LSC dentro de una muestra individual para desarrollar terapias dirigidas a estas células que sostienen la enfermedad y mejorar los resultados de los pacientes.

Los científicos clínicos del Centro de Cáncer Princesa Margarita (Toronto, ON, Canadá) y sus colegas, recolectaron muestras de sangre y médula ósea (MO) de pacientes con leucemia mieloide aguda recién diagnosticados y de adultos sanos. Se aislaron las células mononucleares de baja densidad (MNC) de todas las muestras mediante centrifugación en gradiente de densidad con Ficoll. Se obtuvieron células de linaje negativo (Lin–) a partir de sangre y MO usando aislamiento basado en columna StemSep (Stemcell Technologies Inc, Vancouver, BC, Canadá).

La expresión en la superficie celular de CD200 en muestras primarias de LMA se detectó usando anti-CD200 humano de rata purificado y otros procedimientos. La citometría de flujo se realizó con un instrumento BD LSRII y los datos se analizaron con el software FlowJo (BD Biosciences, San José, CA, EUA). Los científicos también utilizaron estudios de clasificación de células y xenotrasplantes, así como análisis de mutaciones de NPM1 y DNMT3a en las células linfoides y mieloides de xenoinjertos. El ARN se extrajo de las fracciones de LMA clasificadas utilizando el kit RNeasy Mini/Micro (Qiagen Inc, Hilden, Alemania) y se cuantificaron utilizando el Analizador de Fragmentos (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, EUA).

El equipo demostró que CD200 está presente en una mayor proporción de blastos CD45dim en comparación con las células CD45high, más diferenciadas, en las muestras de pacientes con LMA. En 49/65 (75%) de los casos de LMA examinados, CD200 se expresó en ≥10% de los blastos CD45dim; de estos, CD200 identificó LSC dentro de la población de blastos en 9/10 (90%) muestras analizadas en ensayos de xenotrasplante. Se podrían aislar las LSC CD200+ de células madre hematopoyéticas normales (HSC) CD200+ con el uso de marcadores adicionales. En particular, la expresión de CD200 capturó tanto las LSC CD34– como las CD34+ dentro de las muestras individuales de LMA. El análisis de fracciones que contienen LSC CD200+ altamente purificadas de LMA mutadas en NPM1, que comúnmente son CD34–, mostró un enriquecimiento de las firmas de expresión génica primitiva en comparación con las células no fraccionadas.

Los autores concluyeron que, en general, sus hallazgos apoyan el uso de CD200 como un marcador novedoso de LSC que puede capturar todo el compartimento de LSC de las muestras de pacientes con LMA, incluidos los que tienen la mutación NPM1. El estudio fue publicado el 4 de noviembre de 2020 en la revista Blood Advances.

Enlace relacionado:
Centro de Cáncer Princesa Margarita
Stemcell Technologies Inc.
Agilent Technologies
Qiagen Inc


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