Ensayos cuantitativos multiplex detecta el poliparasitismo

La evaluación cuantitativa exacta de la infección por helmintos y protozoos transmitidos por el suelo, son esenciales para la interpretación de los estudios epidemiológicos de estos parásitos, así como para el seguimiento de la eficacia del tratamiento a gran escala y los estudios de eficacia.

 

Puesto que la morbilidad y la transmisión de las infecciones por helmintos están directamente relacionadas con la prevalencia y la intensidad de la infección, existe una necesidad especial de técnicas mejoradas, tales como la metodología de reacción de polimerasa en cadena (PCR), para la evaluación de la intensidad de la infección para ambos propósitos.

 

Un equipo internacional de científicos dirigidos por los del Instituto de Investigación Médica QIMR Berghofer (Herston, Australia) recogieron muestras fecales de un total de 680 personas, procedentes de las comunidades rurales: 467 de muestras provenían de Timor-Leste y 213 muestras eran procedentes de Camboya. Se extrajo el ADN de las muestras de heces y fue sometido a dos reacciones de PCR múltiplex en tiempo real; la primera dirigida tanto a helmintos como a protozoos. Las muestras también fueron objeto del método de concentración por flotación con nitrato de sodio para la identificación y cuantificación de los huevos de helmintos (STH) transmitidos por los suelos y flotación centrífuga con sulfato de zinc para la detección de parásitos protozoarios.

 

La extracción de ADN se realizó utilizando el kit de Aislamiento de ADN, Powersoil (Mo Bio, Carlsbad, CA, EUA). El ADN extraído analizado en dos reacciones de PCR en tiempo real pentaplex. La primera fue un ensayo cuantitativo para Necator americanus, Ancylostoma spp. (A. duodenale, A. ceylanicum), Ascaris spp, Trichuris trichiura.; la segunda fue un ensayo semi-cuantitativo para Entamoeba histolytica, Cryptosporidium spp., Giardia duodenalis, y Strongyloides stercoralis. La prueba Rotor-Gene 6000 (Qiagen, Melbourne, Australia) fue utilizada para todos los ensayos de PCR, con reacciones creadas para ambas reacciones de PCR.

 

La prevalencia mayor del parásito fue detectada usando la PCR multiplex (anquilostomas 2,9 veces más alta, Ascaris 1,2 veces, Giardia 1.6 veces, junto con una detección superior del poliparasitismo un efecto que se vio magnificado a medida que el número de parásitos presentes aumentaba (uno: 40,2% vs. 38,1%, dos: 30,9% vs 12,9%, tres: 7,6% frente a 0,4%, cuatro: 0,4% frente a 0%) Aunque, todas las muestras positivas pata STH eran infecciones de baja intensidad mediante microscopía según la definición en las directrices oficiales, la carga de ADN, detectada por PCR múltiplex, sugería infecciones de mayor intensidad.

 

Los autores concluyeron que la PCR multiplex, además de mostrar una sensibilidad superior, permitió una determinación más exacta de la intensidad, cuando la infección era por Ascaris, anquilostomas y Giardia, en comparación con la microscopía, especialmente en muestras que se pudo observar que tenían poliparasitismo. El rendimiento superior de la PCR multiplex para detectar poliparasitismo y determinar con más exactitud la intensidad de la infección sugiere que es una técnica más adecuada para uso en estudios epidemiológicos y para la monitorización de ensayos de intervención de gran escala. El estudio fue publicado el 28 de enero de 2016, en la revista Public Library of Science Neglected Tropical Diseases.

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