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Validan los marcadores para las repeticiones de mononucleótidos largos para detectar la inestabilidad microsatelital

Por el equipo editorial de LabMedica en español
Actualizado el 11 Jan 2022
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Imagen: El sistema de análisis MSI V1.2 de Promega y los sistemas LMR-MSI son métodos basados en PCR para detectar la inestabilidad de microsatélites (MSI) en tumores sólidos (Fotografía cortesía de Promega)
Imagen: El sistema de análisis MSI V1.2 de Promega y los sistemas LMR-MSI son métodos basados en PCR para detectar la inestabilidad de microsatélites (MSI) en tumores sólidos (Fotografía cortesía de Promega)
La deficiencia de reparación del malapareamiento (dMMR) predice la respuesta a la terapia con inhibidores de puntos de control inmunitarios en tumores sólidos. Los marcadores de repetición larga de mononucleótidos (LMR) pueden mejorar la interpretación de los ensayos de inestabilidad de microsatélites (MSI).

Normalmente, las proteínas de reparación de errores de emparejamiento (MMR) reconocen y reparan estos errores inmediatamente después de la replicación del ADN. Sin embargo, en las células deficientes en MMR, estos errores no se reconocen ni se reparan, lo que da como resultado nuevos alelos de longitud de microsatélites o inestabilidad de los microsatélites. Los ensayos de dMMR se utilizan para detectar el síndrome de Lynch en pacientes con cáncer y la terapia con inhibidores del punto de control inmunitario.

Los oncólogos de la Facultad de Medicina de la Universidad Johns Hopkins (Baltimore, MD, EUA), incluyeron en un estudio 48 muestras de cáncer colorrectal (CCR), 66 muestras de cáncer de endometrio (CE), 12 muestras de cáncer de páncreas (CP) y 22 muestras de otros tipos de cáncer, además de 12 muestras MSI-low (MSI-L) de varios tipos de cáncer. La macrodisección del tumor y los tejidos normales se guio por cortes coloreados con hematoxilina y eosina. A continuación, se extrajo el ADN del tejido incluido en parafina y fijado con formalina utilizando el sistema de preparación de tejidos (Siemens Healthineers, Erlangen, Alemania). Las concentraciones de ADN se cuantificaron con el fluorómetro Qubit (Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA).

Los resultados de inmunohistoquímica (IHQ) para las proteínas MLH1, MSH2, MSH6 y PMS2 se obtuvieron de los informes de patología quirúrgica y se usaron para definir el estado de MMR. Los clones de anticuerpos incluyeron anti-MLH1 (clon M1), anti-MSH2 (clon G219-1129), anti-MSH6 (clon SP93) y anti-PMS2 (clo A16-4), todos de Roche/Ventana Medical Systems (Tucson, AZ, EUA). Todos los ensayos de IHQ se realizaron en el sistema Ventana Benchmark. La amplificación por PCR multiplex de cinco marcadores repetidos de mononucleótidos y dos marcadores repetidos de pentanucleótidos se realizó mediante el Sistema de análisis MSI V1.2 y el Sistema de análisis MSI de repetición larga de mononucleótidos (LMR) (Promega, Madison, WI, EUA). Los productos de amplificación se analizaron utilizando un instrumento de electroforesis capilar ABI 3130×L o ABI 3500×L (Applied Biosystems, Foster City, CA, EUA).

Los investigadores informaron que la sensibilidad y la especificidad del panel LMR MSI para la detección de dMMR fueron del 100 % en el CCR. Los valores de sensibilidad de los paneles MSI V1.2 y LMR MSI en el CE fueron 88 % y 98 %, respectivamente, y los valores de especificidad fueron ambos de 100 %. La sensibilidad del panel LMR fue del 75% en el cáncer de próstata dMMR detectado mediante inmunohistoquímica. Las 22 muestras de otros tipos de cáncer que se clasificaron previamente como MSI alto (MSI-H) también se clasificaron como MSI-H mediante el panel LMR MSI. Para las 12 muestras que se clasificaron previamente como MSI-baja (MSI-L), una muestra se clasificó como microsatélite estable a través del panel LMR MSI, ocho como MSI-L y tres como MSI-H.

Los autores concluyeron que el panel LMR MSI mostró alta concordancia con el panel MSI V1.2 en el CCR y mayor sensibilidad en el CE. El panel LMR MSI mejora la detección de dMMR en cánceres no colorrectales. El estudio fue publicado el 2 de diciembre de 2021 en la revista The Journal of Molecular Diagnosis.

Enlace relacionado:
Facultad de Medicina de la Universidad Johns Hopkins
Invitrogen
Roche/Ventana Medical Systems
Promega
Applied Biosystems

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