Calprotectina circulante como biomarcador en la inflamación relacionada con los neutrófilos

La calprotectina (CLP) actúa como un ligando endógeno de diferentes proteínas de la superficie celular como el receptor 4 tipo Toll y el receptor de productos finales de glicación avanzada que facilitan un efecto proinflamatorio local. La CLP se secreta principalmente a través de una vía de proteína quinasa C (PKC) activa dependiente del calcio, junto a la fuga pasiva de las células necróticas y la liberación en trampas extracelulares de neutrófilos (NET).

Dado que la CLP se libera en el sitio local de la inflamación, se ha sugerido que los niveles plasmáticos de CLP son un biomarcador que refleja la actividad de la enfermedad local en las enfermedades inflamatorias, en contraste con las proteínas de fase aguda convencionales como la proteína C reactiva (PCR), que son producidas principalmente por hepatocitos después de una actividad inflamatoria sistémica inespecífica. Además de reflejar los procesos de inflamación local, la CLP es relativamente estable y fácilmente medible en sangre.

Los científicos biomédicos del Hospital Onze-Lieve-Vrouw (OLV, Aalst, Bélgica) y sus colegas establecieron valores de referencia para 100 voluntarios sanos (mediana de edad [rango] = 42 años [21-64]; 58% mujeres). En el momento del muestreo, todos los voluntarios sanos no tenían quejas físicas y tenían niveles de PCR de menos de 5,0 mg/L. Para evaluar las condiciones preanalíticas, se incluyeron cuatro pacientes con artritis reumatoide (AR) (edad = 60 años [56-73]; 50% mujeres) con enfermedad activa, mediana de PCR 14,2 mg/L (rango = 2,7-73,3 mg / L)].

La CLP circulante se midió en suero y plasma con el ensayo EliA Calprotectin 2, un inmunoensayo fluoroenzimático (FEIA), basado en principios sándwich, en el instrumento Phadia 200 (protocolo suero/plasma, Thermo Fisher Scientific, Friburgo, Alemania), que utiliza anticuerpos monoclonales de ratón anti-calprotectina altamente específicos para los complejos heterodiméricos de calprotectina. Se investigaron diferentes tipos de muestras: suero con/sin separador de gel, heparina, plasma con EDTA y plasma con citrato, tiempo previo a la centrifugación (<2 horas, 6 horas, 24 horas), condiciones de almacenamiento (2–8 °C, 18–25 °C , 30 °C) y tiempo de almacenamiento (24 horas, 72 horas, 7 días).

Los investigadores informaron que, en los controles sanos, las concentraciones de CLP en el suero eran más del doble de la concentración en muestras de plasma con EDTA y citrato (0,909 µg/mL frente a 0,259 µg/mL y 0,261 µg/mL, respectivamente). La heparina, el EDTA y el citrato estabilizaron las concentraciones de CLP hasta 6 horas antes de la centrifugación, mientras que se observaron aumentos significativos en los niveles de CLP cuando el suero no se trató durante ese período de tiempo.

Los autores concluyeron que sus datos revelaron que, tanto en controles sanos como en pacientes con AR, los niveles de CLP son considerablemente más altos en suero que en plasma. El establecimiento de valores de referencia en controles sanos mostró que el 95% de los límites superiores dependían tanto del tipo de muestra como de la PCR. Los tubos de suero deben centrifugarse dentro de las dos horas y los tubos de plasma dentro de las seis horas posteriores a la extracción de sangre. Todos los tipos de muestras investigados se pueden almacenar refrigerados (2-8 °C) hasta siete días, a temperatura ambiente (18-25 °C) hasta 24 horas, congelados (-20 °C) hasta tres meses y puede tener cinco ciclos de congelación-descongelación sin un cambio relevante en la concentración de CLP. El estudio fue publicado el 6 de marzo de 2021 en la revista Clinica Chimica Acta.

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Hospital Onze-Lieve-Vrouw