Validan un clasificador de células de mesón en el contexto de contención de bioseguridad

La clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS) es a menudo la técnica más apropiada para obtener poblaciones puras de un tipo de célula de interés para el análisis posterior. La capacidad de clasificar poblaciones puras de células inmunes es una herramienta fundamental para los inmunólogos.

Se pueden generar gotas de aerosol durante la clasificación, lo que plantea un riesgo de bioseguridad cuando se trabaja con muestras que contienen patógenos del grupo de riesgo 3 como Francisella tularensis, Mycobacterium tuberculosis, Yersinia pestis y el coronavirus del síndrome respiratorio agudo severo 2.

Los especialistas en patógenos pulmonares de Rocky Mountain Laboratories (Hamilton, MT, EUA), realizaron pruebas de aerosoles como parte de la evaluación de bioseguridad del MACSQuant Tyto (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Alemania), un clasificador de células mediante un cartucho completamente cerrado. También establecieron procedimientos de control de calidad para evaluar de manera rutinaria el desempeño de los instrumentos. La prueba de aerosol se realizó en el instrumento FACSAria II (BD Biosciences, San Diego, CA, EUA), con el sistema de administración de aerosoles desactivado como control positivo para la generación de aerosoles.

Los científicos informaron que antes del uso de Tyto, en la mesa de trabajo para clasificar células en un laboratorio BSL-3, era necesario determinar empíricamente si se generaban aerosoles durante el procedimiento de clasificación celular. Utilizaron un método novedoso que utiliza perlas de 1,0 μm con fluorescencia interna para realizar pruebas de aerosol en el Tyto. Estas perlas eran de tamaño uniforme e intensamente fluorescentes en el canal de isotiocianato de fluoresceína (FITC).

Como control positivo, detectaron aerosoles generados por el FACSAria II interno cuando se desactivó el Sistema de Gestión de Aerosoles y se interrumpió el flujo. Como era de esperar, se detectaron perlas en el cubreobjetos después de solo una exposición de 30 segundos. El MACSQuant Tyto no produjo aerosoles como parte del procedimiento de clasificación. Los científicos establecieron una pureza de >96%, un rendimiento de agotamiento de >80% y una eficiencia de clasificación de >85% como puntos de referencia que deben ser cumplidos durante las pruebas de control de calidad.

Los autores concluyeron que utilizaron el clasificador de células Tyto en su laboratorio BSL-3. Este instrumento no solo ocupa poco espacio, sino que lo más importante es que no genera aerosoles durante el procedimiento de clasificación. El uso de esta tecnología mejorará los estudios inmunológicos actuales en los laboratorios de contención al permitir que un mayor número de grupos científicos aíslen tipos de células involucradas en la respuesta inmune a patógenos de alta consecuencia para aplicaciones posteriores. El estudio fue publicado el 24 de noviembre de 2021 en la revista Applied Biosafety.

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Rocky Mountain Laboratories
Miltenyi Biotec