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RANDOX LABORATORIES

Adaptan prueba molecular para Parkinson y demencia con cuerpos de Lewy

Por el equipo editorial de Labmedica en español
Actualizado el 21 Mar 2018
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Imagen: El lector de microplacas multimodo FLUOstar Omega con seis modos de detección (Fotografía cortesía de BMG Labtech).
Imagen: El lector de microplacas multimodo FLUOstar Omega con seis modos de detección (Fotografía cortesía de BMG Labtech).
La enfermedad de Parkinson (EP), la atrofia multisistémica (MSA), la demencia con cuerpos de Lewy (DLB) (o demencia con cuerpos de Lewy) se denominan α-sinucleinopatías, debido a la acumulación anormal de agregados de una proteína llamada α-sinucleína (αSyn) en el cerebro.

Muchas enfermedades neurodegenerativas están relacionadas con la acumulación de proteínas específicas mal plegadas. Estos depósitos se identifican en el análisis post mortem del tejido cerebral, lo que permite realizar diagnósticos definitivos basados en los hallazgos neuropatológicos y moleculares específicos.

Un equipo de científicos dirigido por los miembros de los Institutos Nacionales de la Salud (Hamilton, MT, EUA) analizó 60 muestras de líquido cefalorraquídeo (LCR), incluyendo 12 de personas con enfermedad de Parkinson, 17, de personas con demencia con cuerpos de Lewy y 31 controles, incluidos 16 que tenían enfermedad de Alzheimer. Se envió una muestra para el análisis del recuento celular, las proteínas totales y la glucosa, a un laboratorio local. El análisis cerebral en la autopsia se realizó con la mitad del cerebro izquierdo fijado con formalina, y cortado en serie en cortes de 1 cm y bloques de tejido y se procesó para el examen histopatológico mediante H&E, y tioflavina-S (Thio-S) para detectar depósitos de tau y de β-amiloide. La patología de los cuerpos de Lewy se evaluó usando inmunoreactividad de α-sinucleína fosforilada con un anticuerpo monoclonal de ratón.

El equipo utilizó un ensayo mejorado de conversión inducida por temblores de α-sinucleína en tiempo real (αSyn RT-QuIC) que tiene sensibilidad y especificidad similares a los ensayos previos, pero que se puede realizar en 1 a 2 días con cuantificación. Las reacciones RT-QuIC se realizaron en placas negras de 96 pozos con un fondo transparente. Después del procesamiento, las placas se sellaron con una película selladora de placas (Nalgene Nunc International, Rochester, NY, EUA) y se incubaron a 42°C en un lector de placa BMG FLUOstar Omega (BMG Labtech, Ortenberg, Alemania) con ciclos de 1 minuto de agitación (400 rpm doble orbital) y 1 minuto de reposo durante el tiempo de incubación indicado.

El análisis ciego del líquido cefalorraquídeo de 29 casos de sinucleinopatía (12 de Parkinson y 17 de demencia con cuerpos de Lewy) y 31 controles sin sinucleinopatía, incluidos 16 casos de Alzheimer, arrojó un 93% de sensibilidad diagnóstica y un 100% de especificidad, para esta prueba hasta el momento. Los análisis de dilución de punto final permitieron la cuantificación de cantidades relativas de formas patógenas asociadas de activación de siembra de la enfermedad de α-sinucleína (αSynD) en muestras de líquido cefalorraquídeo, y la detección en tan solo 0,2 μL.

Estos resultados confirman que la actividad de siembra de αSynD está presente en el líquido cefalorraquídeo. El equipo también demostró que esta sustancia puede ser detectada y cuantificada rápidamente, incluso en etapas sintomáticas tempranas de la sinucleinopatía. El estudio fue publicado el 9 de febrero de 2018 en la revista Acta Neuropathologica Communications.


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