Método basado en RMN mide los niveles de citrato en la sangre circulante

Estudios recientes muestran que el citrato está involucrado en varios procesos biológicos como inflamación, cáncer, secreción de insulina, acetilación de histonas, desarrollo neurológico y la aciduria hidroxiglutárica, lo que indica que tiene funciones más allá de la regulación de la energía.

Se han observado asociaciones del citrato con el glaucoma, la enfermedad de hígado graso no alcohólica (EHGNA), enfermedad ósea y mortalidad. Monitorizar el citrato circulante podría ser una herramienta diagnóstica. Si bien en la actualidad, el citrato urinario es usado generalmente como un factor de riesgo en la formación de cálculos renales, el citrato en suero/plasma se utiliza muy poco para diagnóstico o pronóstico de enfermedades.

Los técnicos del Laboratory Corporation of America Holdings (Labcorp, Morrisville, NC, EUA), tomaron muestras de sangre de voluntarios en tubos Greiner, las dejaron coagular (30 minutos) en posición vertical y las centrifugaron (3.000 rpm, 10-15 minutos) inmediatamente después de estar coaguladas. Las muestras recolectadas en tubos lisos con tapa roja y tubo para suero con barrera de gel BD (Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, EUA), se dejaron en posición vertical (los tubos tapa roja durante 45 minutos; tubos BD Gel Barrier durante 30 minutos) a temperatura ambiente para que se coagularan y fueron centrifugados rápidamente.

La preparación de la muestra (ej., dilución 1:1 (v/v) del suero o plasma con buffer fosfato) se realizó de manera automática en el analizador Vantera Clinical (Liposcience, Raleigh, NC). Los espectros unidimensionales 1H NMR se recogieron en un espectrómetro 400 MHz a 47 °C. Se usó WET para suprimir la señal del agua. El tiempo total de adquisición para cada espectro fue de 48 segundos. Los instrumentos RMN se calibran a diario con ácido trimetilacético 15 mM, como un calibrador y patrón de referencia para verificar el desempeño del instrumento. Para la cuantificación se usó una región restringida del espectro recogido, donde aparecen las cuatros resonancias del citrato. Para determinar si el ensayo tiene sensibilidad adecuada para medir las concentraciones de citrato relevantes clínicamente, el ensayo se usó para cuantificar el citrato en 533 adultos aparentemente sanos y en la población general (n=133.567).

El equipo reportó que el límite de cuantificación (LOQ) para el ensayo fue de 1,48 mg/dL. La linealidad fue demostrada en un amplio rango de concentraciones (1,40 a 4,46 mg/dL). Los coeficientes de variación (%CV) para la precisión intra e interensayo variaron de 5,8 a 9,3 y de 5,2 a 9,6%, respectivamente. Las sustancias analizadas no provocaron interferencias con los resultados del ensayo. La comparación del tipo de muestra reveló un sesgo <1% entre las muestras de suero y plasma, excepto para el plasma heparinizado (sesgo de 3%). Se demostró una estabilidad de hasta 8 días a temperatura ambiente y más tiempo a temperaturas más bajas. En una cohorte de adultos aparentemente sanos, el intervalo de referencia fue de <1,48 a 2,97 mg/dL. Se observaron valores ligeramente más altos en la población general.

Los autores concluyeron que el ensayo basado en RMN, desarrollado recientemente, exhibe características analíticas que permiten la cuantificación exacta de concentraciones de citrato clínicamente relevantes. El ensayo proporciona un medio sencillo y rápido de analizar muestras para estudios clínicos y otros. El estudio fue publicado el 18 de marzo de 2021 en la revista “Practical Laboratory Medicine”.

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