Secuenciación de próxima generación del LCR diagnostica la neurobrucelosis

La brucelosis es la infección zoonótica más común en el mundo con más de 500,000 casos nuevos reportados anualmente en todo el mundo. Es una infección multisistémica, con presentaciones clínicas variables; la brucelosis con afectación del sistema nervioso se conoce como Neurobrucelosis (NB).

Las características clínicas y los hallazgos del líquido cefalorraquídeo (LCR) en la NB generalmente no son específicos, y la sensibilidad y especificidad del cultivo de rutina y las pruebas serológicas varían, lo que dificulta el diagnóstico de esta enfermedad. En áreas endémicas, la NB se debe considerar como una alternativa en el diagnóstico diferencial de pacientes que presentan síntomas neurológicos y fiebre concomitante.

Científicos del Hospital Universitario Peking Union (Beijing, China) y sus colegas, estudiaron una serie de casos que incluyó a cuatro pacientes consecutivos que ingresaron en el Departamento de Neurología entre el 1 de junio de 2016 y el 1 de junio de 2017. El grupo demográfico, los hallazgos clínicos, radiológicos y patogénicos, junto con los datos de tratamiento y resultados, fueron obtenidos del sistema de información del hospital.

El equipo utilizó una muestra de LCR de 300 μL de cada paciente o un control negativo “sin plantilla” (NTC) que se transfirió a un nuevo tubo estéril; de esta muestra se extrajo el ADN directamente con el kit TIANamp Micro DNA (Tiangen Biotech, Beijing, China). El ADN extraído se usó para la construcción de bibliotecas de ADN. Las bibliotecas de ADN se construyeron de acuerdo con el protocolo estándar de la plataforma de secuenciación BGISEQ-100 (BGI-Tianjin, Tianjin, China).

Para medir los adaptadores antes de la secuenciación, se realizó un control de calidad con el bioanalizador Agilent 2100 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, EUA) combinado con la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR). Se utilizó electroforesis en gel de agarosa para analizar los productos de la PCR, y se realizó la secuenciación de Sanger con un analizador de ADN ABI PRISM 3730 (Applied Biosystems, Foster City, CA, EUA) para validar los resultados de la secuenciación.

Los cuatro pacientes fueron diagnosticados rápidamente con NB usando la secuenciación de próxima generación (NGS) del LCR en pacientes con sospecha clínica de infecciones del SNC, aunque las manifestaciones clínicas variaron dramáticamente entre estos pacientes. La NGS del LCR reveló que las lecturas de secuencia identificadas que correspondían a las especies de Brucella variaban de 11 a 104, con una cobertura genómica que variaba de 0,043% a 0,4%. El diagnóstico rápido llevó a un tratamiento rápido con los antibióticos apropiados. Los autores concluyeron que su estudio demostró el poder de la NGS del LCR junto con una tubería bioinformática para el diagnóstico de la NB. El estudio fue publicado en la edición de febrero de 2018 de la revista International Journal of Infectious Diseases.