Desarrollan reacción en cadena de la polimerasa anidada multiplex para las infecciones congénitas

El diagnóstico definitivo de infecciones congénitas y perinatales depende en gran medida de los resultados de las pruebas de laboratorio.

El hallazgo de anticuerpos positivos de inmunoglobulina M materna (IgM), generados contra cierto patógeno en el examen serológico prenatal, aumenta la sospecha de una infección congénita, pero el patógeno puede no cruzar la placenta. Por otro lado, un resultado positivo de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en muestras de líquido amniótico (LA) confirma el diagnóstico.

Los científicos de la Universidad de São Paulo (São Paulo, Brasil) desarrollaron una técnica de PCR anidada multiplex para la detección simultánea de siete patógenos que contienen ADN en sus genomas en casos sospechosos de infección congénita. Los participantes elegibles eran mujeres embarazadas con anticuerpos IgM positivos a uno de los patógenos en el cribado serológico prenatal, asociados o no con anormalidades del ultrasonido fetal o serología fetal positiva. Los recién nacidos cuyas madres no asistieron a la atención prenatal se incluyeron cuando presentaron sintomatología y parámetros de laboratorio que sugirieron infección. La tasa de detección de la PCR multiplex anidada se comparó con la de la serología materna, fetal y neonatal, así como con la inmunohistoquímica placentaria y las amplificaciones no comerciales.

Los exámenes de laboratorio incluyeron hemogramas que mostraron leucocitosis o leucopenia, neutropenia, trombocitopenia o aumento de la proteína C reactiva en suero (kit ultrasensible de PCR, Turbitest AA, Wiener Lab, Rosario, Argentina). Las muestras de suero materno y neonatal se analizaron mediante el ensayo AxSYM (Abbott Laboratories, Abbott Park, IL, EUA) basado en la tecnología de inmunoensayo enzimático de micropartículas para evaluar la IgM y la IgG de Toxoplasma gondii. Los anticuerpos IgM e IgG contra el herpes simple, el virus varicela-zoster (VZV) y el parvovirus B19 (PV) se evaluaron mediante los ensayos quimioluminiscentes Liaison (DiaSorin Ltd, Saluggia, Italia). El producto de PCR de la segunda ronda se sometió a secuenciación de ADN en el analizador genético ABI PRISM 3500 (Applied Biosystems, Foster City, CA, EUA) para confirmar que los productos amplificados por PCR multiplex anidados realmente pertenecían a los patógenos detectados.

Los científicos informaron que de 161 casos sospechosos, la PCR anidada multiplex detectó 60 (37,3%), mientras que las pruebas disponibles en los laboratorios hospitalarios detectaron 13 de 60 (21,7%) de los casos detectados por la PCR anidada multiplex, demostrando una tasa de detección 4,6 veces mayor para la PCR multiplex anidada. Las amplificaciones positivas fueron T. gondii (32 casos), citomegalovirus (14 casos), parvovirus B19 (cinco casos) y adenovirus (cinco casos). En cuatro casos, se detectaron dos patógenos simultáneamente. Todos los tipos de matrices biológicas eran adecuadas para la amplificación. La secuenciación de productos de PCR anidados multiplex confirmó los hallazgos moleculares.

Los autores concluyeron que la PCR anidada multiplex aumentó significativamente el número de infecciones congénitas diagnosticadas. Dada la escasez de ADN recuperado del líquido amniótico y de algunas muestras neonatales, este PCR multiplex anidado permite la detección simultánea de siete patógenos asociados con infecciones congénitas de una manera confiable, más rápida, rentable y más sensible. El estudio fue publicado en la edición de enero de 2020 de la revista Archives of Pathology and Laboratory Medicine.

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Universidad de São Paulo
Wiener Lab
Abbott Laboratories
DiaSorin Ltd
Thermo Fisher Scientific