Lector determina deficiencia enzimática en pacientes anémicos

Se ha desarrollado un método sencillo para determinar la actividad de la 5_nucleotidasa pirimidina (P5_N-1), en los eritrocitos humanos.

El método utiliza un lector de placas de análisis ELISA, para calcular directamente el producto de una reacción enzimática a partir de su absorbancia ultravioleta.

Los científicos del Instituto Nacional de Inmunohematología (Mumbai, India) determinaron la actividad de P5_N-1 con base en la liberación de fósforo inorgánico (Pi) después de la incubación con uridina monofosfato/citidina monofosfato. El fósforo inorgánico (Pi), un producto de la reacción enzimática, se mide directamente y también se calculó la relación purina/pirimidina. Las muestras de sangre fueron tomadas de un total de 72 personas, entre ellas 50 controles normales, cuatro casos de deficiencia hereditaria de P5_N-1, seis individuos heterocigotos con deficiencia de P5_N-1, dos casos de envenenamiento por plomo asociado con rasgo asociado talasémico y 10 portadores de talasemia.

Los pacientes deficientes en P5_N-1 mostraron una reducción en la actividad P5_N-1 en comparación con los controles utilizando el lector de ELISA de 4,06 moles de Pi/hr/g hemoglobina (Hb) y 6,25 moles de Pi/hr/g Hb utilizando un espectrofotómetro. Para el grupo control normal, el resultado del lector de ELISA fue de 13,24 moles Pi/hr/g Hb y para el espectrofotómetro fue de 18,25 moles Pi/hr/g. Los individuos heterocigotos mostraron una actividad intermedia con el lector de ELISA, la media fue de 6,06 moles Pi/hr/g de Hb, y para el espectrofotómetro la media fue de 8,06 moles Pi/hr/g. Estos resultados en los casos de los heterocigotos para la deficiencia de P5_N-1 se hubieran pasado por alto usando simplemente el método de la relación de nucleótidos purina/pirimidina.

Los autores concluyeron que la principal ventaja es que los lectores de ELISA están disponibles en la mayoría de los laboratorios de hematología más pequeños en los países en desarrollo, más que los espectrofotómetros. Son más económicos que los espectrofotómetros, más simples de operar y menos laboriosos. También se evita el uso de material radiactivo o de la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), lo cual es un beneficio significativo. La deficiencia en Pirimidina 5_nucleotidasa tipo I es la anomalía más frecuente del metabolismo celular de los nucleótidos causando anemia hemolítica hereditaria no esferocítica. El estudio fue publicado en la edición digital de junio de 2012 de la revista International Journal of Laboratory Hematology.

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National Institute of Immunohaematology