Exploran el uso de complejos de troponina en los pacientes con IAM

Un ataque cardíaco es una afección potencialmente mortal que ocurre cuando el flujo sanguíneo al músculo cardíaco se interrumpe abruptamente y causa daño tisular. Esto suele ser el resultado de un bloqueo en una o más de las arterias coronarias.

El complejo de troponina es un componente del aparato contráctil de los músculos estriados y cardíacos. Se usa ampliamente la medición de isoformas cardíacas de troponina I (cTnI) y de troponina T (cTnT) para el diagnóstico de infarto agudo de miocardio (IAM). En el corazón, estos complejos de troponina cardíaca están compuestos por estas isoformas cardíacas específicas y una isoforma cardíaca/esquelética lenta de troponina C (TnC). En el infarto agudo de miocardio (IAM), se liberan troponinas del tejido necrótico al torrente sanguíneo.

Un equipo de científicos se vinculó con los de la empresa comercial HyTest Ltd (Turku, Finlandia) y recolectaron muestras de sangre en serie de 38 pacientes (148 muestras en total) entre 2 y 33 horas después del inicio del dolor de pecho. Se extrajo sangre mediante punción venosa en tubos de recolección de sangre vacutainer de 10 mL recubiertos con heparina de litio. Los tubos se invirtieron varias veces y se centrifugaron durante 20 minutos a 1500g. El plasma resultante se decantó y se almacenó a -70°C en tubos de polipropileno de 5 mL. Las muestras de plasma de heparina de 11 individuos aparentemente sanos, de 25 a 40 años de edad, se agruparon y almacenaron a -70°C.

El equipo midió las concentraciones de cTnI y cTnT en todas las muestras de plasma de Li-heparina mediante ensayos de inmunofluorescencia (FIA) internos utilizando los ensayos TnI19C7-TnI560 y TnT329-TnT406, respectivamente. Todas las muestras fueron analizadas por un FIA de 2 pasos usando anticuerpos monoclonales (mAbs) marcados con Eu. También realizaron “ensayos combinados mixtos” en los que los mAbs de captura y detección eran específicos de diferentes componentes de los complejos de troponina. Los estudios de filtración en gel (GF) se realizaron utilizando un sistema de cromatografía pura AKTA en una columna HiLoad Superdex 200 PG 16/60 (GE Healthcare, Chicago, IL, EUA). Las troponinas cardíacas y sus fragmentos se analizaron utilizando SDS-PAGE con gradiente de 15% a 22,5%, según Laemmli en condiciones reductoras, utilizando una unidad de electroforesis Hoefer SE280 (Hoefer, Inc, Holliston, MA, EUA).

Las muestras de plasma de pacientes con IAM contenían los siguientes complejos de troponina: (a) un complejo cTnI-cTnT-TnC (ITC), compuesto por cTnT de tamaño completo de 37 kDa o su fragmento de 29 kDa y cTnI de tamaño completo de 29 kDa o sus fragmentos de 27 kDa; (b) ITC con menor peso molecular (LMW-ITC) en el que cTnT estaba truncado a los fragmentos C-terminales de 14 kDa; y (c) un complejo binario cTnI-cTnC compuesto de cTnI truncado de aproximadamente 14 kDa.

Durante la progresión de la enfermedad, la cantidad de ITC en las muestras de IAM disminuyó, mientras que las cantidades de LMW-ITC y los fragmentos centrales cortos de cTnT de 16 a 20 kDa aumentaron. Casi todos los cTnT de tamaño completo y un fragmento de cTnT de 29 kDa en muestras de plasma de pacientes con IAM fueron los componentes de ITC. No se encontró cTnT de tamaño completo libre en muestras de plasma con IAM. Solo fragmentos centrales de cTnT de 16 a 27 kDa estaban presentes en forma libre en la sangre de los pacientes.

Los autores concluyeron que existe un complejo de troponina ternaria en dos formas en la sangre de pacientes con IAM: ITC de tamaño completo y LMW-ITC. El complejo binario cTnI-cTnC y los fragmentos cTnT libres también están presentes en la sangre de los pacientes. El estudio fue publicado en la edición de julio de 2019 de la revista Clinical Chemistry.

Enlace relacionado:
HyTest Ltd
GE Healthcare
Hoefer, Inc