Evalúan prueba de ARN del SARS-CoV-2 entre pacientes recuperados de COVID-19

La PCR en tiempo real no es un cultivo viral y no permite determinar si el virus es viable y transmisible.

Un equipo de científicos médicos asociados a la Università Cattolica del Sacro Cuore (Roma, Italia) estudió a 176 pacientes recuperados con COVID-19 que fueron ingresados en el servicio ambulatorio posagudo de su institución, entre el 21 de abril y el 18 de junio de 2020, para seguimiento de COVID-19. Antes de eso, los pacientes habían interrumpido el aislamiento de acuerdo con los criterios actuales que requieren que no haya fiebre durante tres días consecutivos, mejoría en otros síntomas y dos resultados negativos de RT-PCR para ARN del SARS-CoV-2 con 24 horas de diferencia.

Se analizaron muestras de hisopados nasales/orofaríngeos (NOS) de los pacientes durante el seguimiento para determinar el ARN total (genómico) y replicativo (subgenómico) del SARS-CoV-2 mediante ensayos de Detección y Cuantificación del ARN total del SARS-CoV-2, mediante RT-PCR. El ARN viral total se extrajo de las muestras NOS utilizando el sistema automatizado Nimbus (Seegene, Seúl, Corea del Sur) que utiliza el kit de Cartucho Universal STARMag para la extracción de ARN y la preparación del ensayo de PCR.

La prueba de RT-PCR se realizó utilizando el ensayo Seegene Allplex 2019-nCoV, un ensayo de un solo tubo dirigido a tres genes virales (E, RdRP y N). La cuantificación del ARN viral total se realizó con el ensayo Quanty COVID-19 (Clonit S.r.l, Milán, Italia). Las muestras de suero se analizaron con un ensayo comercial (Euroimmun; Lübeck, Alemania), un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) que utiliza el dominio S1 recombinante de la proteína Spike (S) del SARS-CoV-2 como antígeno, para la detección semicuantitativa de anticuerpos IgG e IgA anti-SARS-CoV-2.

Los investigadores informaron que 32 de 176 muestras NOS (18,2%) dieron positivo para el ARN total del SARS-CoV-2, con cargas virales que oscilaron entre 1,6 × 101 y 1,3 × 104 copias de ARN del SARS-CoV-2 por mL. Una de las 32 muestras (3,1%) tenía ARN replicativo de SARS-CoV-2. También se analizaron muestras de los 32 pacientes en el momento del diagnóstico de COVID-19 y, como era de esperar, tenían ARN replicativo de SARS-CoV-2. Todos menos uno de 32 pacientes, tuvieron un resultado serológico positivo contra el SARS-CoV-2, así como 139 de los 144 pacientes restantes, en el seguimiento de COVID-19. El paciente que resultó serológicamente negativo no fue el que dio positivo en la prueba del ARN replicativo del SARS-CoV-2. El tiempo medio ± DE desde el diagnóstico de COVID-19 hasta el seguimiento fue de 48,6 ± 13,1 días en 32 pacientes y de 57,7 ± 16,9 días en 144 pacientes.

Los autores concluyeron que su estudio destaca que muchos pacientes que se recuperaron de COVID-19 pueden permanecer positivos (aunque en niveles más bajos) para el ARN del SARS-CoV-2, pero solo una minoría de los pacientes pueden portar un SARS-CoV-2 replicante, en el tracto respiratorio. El estudio fue publicado el 12 de noviembre de 2020 en la revista JAMA Internal Medicine.

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