Microscopía sin lentes en LCR para diagnosticar la meningitis

La realización del análisis citológico del líquido cefalorraquídeo (LCR) y la enumeración de leucocitos y eritrocitos es un primer paso de rutina en el diagnóstico de laboratorio de la meningitis. La citología del LCR y el recuento de células se realizan rutinariamente usando la microscopía óptica.

 

La observación por microscopía óptica es una tarea que depende del operador, por lo que, tanto el recuento como el informe posterior, están sujetos a variabilidad; esto puede de hecho resultar en la clasificación errónea de la muestra del LCR como meningitis o no meningitis.

 

Los científicos de la Universidad de Aix Marseille (Marsella, Francia), realizaron un estudio de variabilidad prospectiva ciego entre operadores durante dos meses. Consistió en el recuento de células, mediante microscopía óptica, por cinco operadores diferentes en 35 muestras consecutivas e independientes de LCR. Los recuentos de células se realizaron en placas de recuento Glasstic 10 con cuadrículas (KOVA, Garden Grove, CA, EUA), realizando el recuento de leucocitos y eritrocitos en las nueve segmentaciones celulares correspondientes al recuento por mm3.

 

El microscopio óptico utilizado en el estudio fue un Olympus CX41 (Tokio, Japón, www.olympus-lifescience.com). Para comparar los resultados del microscopio, el equipo utilizó un algoritmo de microscopía, sin lentes, adaptado para contar las células del líquido cefalorraquídeo y discriminar los leucocitos de los eritrocitos, el cual fue modificado paso a paso en el análisis prospectivo de 215 muestras de líquido cefalorraquídeo. La adquisición fue secuencial y cada LED rojo, verde y azul, fue iluminado, uno tras otro, mientras que los tres hologramas de campo ancho, correspondientes, fueron adquiridos por el sensor complementario de semiconductor de óxido metálico (CMOS) (rojo, verde y azul).

 

En el primer paso, los recuentos prospectivos de microscopía óptica de los leucocitos realizados por cinco operadores diferentes produjeron una clasificación errónea global del 16,7% en 72 muestras de líquido cefalorraquídeo en las categorías de meningitis/no meningitis, utilizando un valor de corte de 10 leucocitos/μL. En el segundo paso, el algoritmo definido dio una sensibilidad del 100% y una especificidad del 86% en comparación con los diagnósticos confirmados. En el tercer paso, se realizó un análisis microscópico sin lentes oculares de 116 muestras de líquido cefalorraquídeo, incluyendo seis casos de meningitis infecciosa, confirmada por microbiología, proporcionando una sensibilidad del 100% y una especificidad del 79%.

 

Los autores concluyeron que la microscopía adaptada sin lente está emergiendo como una técnica independiente del operador para el recuento rápido de leucocitos y eritrocitos en el líquido cefalorraquídeo. En particular, esta técnica es adecuada para el diagnóstico rápido de la meningitis en los laboratorios de punto de atención. El estudio fue publicado el 3 de enero de 2017, en la revista Scientific Reports.