Desarrollan análisis micro LC-MS/MS de alta sensibilidad para estradiol en suero

Existen fuertes demandas para medir con exactitud el estradiol (E2) a bajas concentraciones, de menos de 20 pg/mL, en las mujeres posmenopáusicas, hombres, pacientes pediátricos y pacientes que reciben tratamiento contra el cáncer de mama.

 

Los inmunoensayos automatizados son las técnicas más utilizadas para la medición de E2 en los laboratorios clínicos; sin embargo, sufren de una mala exactitud y precisión a bajas concentraciones fisiológicas de E2. Se ha desarrollado un método de alta sensibilidad, sin derivar, utilizando la cromatografía micro líquida-- espectrometría de masas líquida micro (LC-MS/MS), para medir de forma fiable las concentraciones de E2 por debajo de 5 pg/mL mediante el uso de un volumen de muestra bajo.

 

Los científicos de la Universidad de Chicago (Illinois, EUA) utilizaron muestras para la comparación de método usando muestras sobrantes recuperadas del laboratorio de química clínica. Se mezcló un total de 290 μL de muestra con estándar interno (EI), E2-d4, y se extrajo con una mezcla de hexano/acetato de etilo (90/10) (v/v). Después de la extracción, la muestra se separó mediante un sistema de micro LC 200 de Eksigent Ekspert, con una velocidad de flujo de 35 μL/min en un tiempo total de procesamiento de 3,5 minutos y se detectó a través de un espectrómetro de masas QTRAP 6500 (Sciex, Framingham, MA, EUA) en un modo negativo usando transiciones: 271/145 (cuantificador) y 271/143 (calificador). En este método, era crucial usar columnas de HPLC con estabilidad a un pH> 10.

 

Las mediciones de E2 por LC-MS / MS se compararon con el inmunoensayo automatizado Cobas 8000 E2 II (Roche Diagnostics, Basilea, Suiza) utilizando 42 muestras de plasma recogidas en tubos de heparina de litio y con un radioinmunoensayo indirecto desarrollada en el laboratorio usando 38 muestras de suero recogidas en tubos de suero sin aditivo. El método LC-MS/MS mostró una buena correlación con la prueba E2 RIA y una modesta correlación con el inmunoensayo automatizado E2 Roche Cobas. El estudio de validación demostró intervalos lineales amplios que oscilaban desde 3,0 hasta 820 pg/mL. La precisión total fue inferior al 15% en todos los niveles de control de calidad (QC), y el límite de cuantificación (LC) fue de 3,0 pg/mL. El estudio fue publicado en la edición de julio 2016 de la revista Journal of Applied Laboratory Medicine.

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