Inmunoanálisis múltiplex de microesferas identifica tres infecciones por flavivirus

Los cuatro serotipos del virus del dengue (DENV) pertenecen al serocomplejo DENV; el Virus del Nilo Occidental (VNO) y el virus de la encefalitis japonesa (JEV) para el serocomplejo JEV; el virus de la fiebre amarilla (YFV), como un solo miembro, y el ZIKV.

Los especialistas en medicina tropical de la Universidad de Hawái en Manoa (Honolulu, HI, EUA) y sus colegas desarrollaron un inmunoensayo de microesferas IgG multiplex de alto rendimiento (MIA) utilizando las proteínas NS1 del DENV1-DENV4, ZIKV y el virus del Nilo Occidental (VNO) para analizar muestras de casos confirmados por reacción de cadena de la polimerasa de transcripción inversa, incluyendo infecciones primarias por DENV1, DENV2, DENV3, WNV y ZIKV, infección secundaria por DENV e infección por ZIKV con infección previa por DENV.

El gen NS1 (que corresponde a los residuos de aminoácidos 1–352) del ZIKV (cepa HPF2013) con una etiqueta His en el extremo C se optimizó en el codón (Integrated DNA Technologies, Coralville, IA, EUA). Seis proteínas NS1 purificadas, albúmina de suero bovino (BSA) y PBS (como control de antígeno negativo) fueron acopladas individualmente en ocho tipos de microesferas carboxiladas magnéticas que contenían diferentes fluoróforos (MagPlexTM-C) (Luminex Corporation, Austin, TX, EUA) utilizando el proceso de carbodiimida en dos pasos a temperatura ambiente. Los inmunoensayos de microesferas (MIA) fueron realizados y leídos por una máquina Luminex 200. Se realizaron ensayos inmunosorbentes ligados a enzimas para DENV-1, DENV-2, DENV-3 y ZIKV-NS1 IgG.

Los científicos informaron que una combinación de cuatro DENV NS1 IgG MIA reveló una sensibilidad del 94,3% y una especificidad del 97,2% para detectar la infección por DENV. Los MIA de ZIKV y WNV NS1 IgG tuvieron una sensibilidad/ especificidad de 100%/87,9% y 86,1%/78,4%, respectivamente. Se encontró una correlación positiva entre las lecturas de ELISA y MIA para los diferentes NS1 ensayados. Con base en la proporción de la intensidad de fluorescencia mediana relativa de ZIKV NS1 a DENV1 NS1, el IgG MIA puede diferenciar la infección por ZIKV de la infección previa por DENV y de la infección secundaria por DENV con una sensibilidad de 88,9% –90,0% y una especificidad de 91,7% –100,0%.

Los autores concluyeron que el ensayo multiplex y de alto rendimiento podía ser aplicado al serodiagnóstico y la vigilancia serológica de las infecciones por DENV, ZIKV y WNV en regiones endémicas. El estudio se publicó el 23 de agosto de 2019 en la revista PLOS Neglected Tropical Diseases.

Enlace relacionado:
Universidad de Hawái en Manoa
Integrated DNA Technologies
Luminex Corporation