Se evalúan los tubos de almacenamiento para el análisis de los ácidos nucleicos circulantes

Los ácidos nucleicos circulantes, como los microARN (miARN) y el ADN libre de células (cfADN), se han vuelto cada vez más importantes para servir como biomarcadores nuevos potenciales para una variedad de enfermedades humanas.

Si los ácidos nucleicos libres de células se van a utilizar de forma rutinaria en el diagnóstico, la diferencia en los niveles de miARN y cfADN en plasma entre los individuos sanos y enfermos debe exceder la variabilidad preanalítica y analítica. Las biopsias líquidas tienen muchas ventajas en comparación con las técnicas de diagnóstico convencionales, incluida su naturaleza no invasiva y la posibilidad de realizar muestreos repetitivos durante el curso de la enfermedad.

Los científicos médicos del Hospital Universitario de Heidelberg (Heidelberg, Alemania) evaluaron la capacidad de diferentes tubos de almacenamiento de sangre (BST) desarrollados por cuatro fabricantes para conservar muestras de sangre en condiciones basadas en el tiempo. Más específicamente, querían encontrar la herramienta que mejor estabilizara la hemólisis y los biomarcadores de miARN asociados al cáncer de mama, además de dos genes asociados con el cáncer para posibles aplicaciones de diagnóstico clínico posteriores. Inicialmente, los científicos probaron los límites de los tubos EDTA convencionales utilizados para las pruebas rutinarias durante un período de 12 horas.

Se extrajo sangre de individuos sanos de diferentes edades, géneros y etnias mediante venopunción estándar directamente en S-monovettes EDTA K3 de 9 mL (Sarstedt, Nümbrecht, Alemania). En un segundo estudio, se extrajeron muestras de sangre en tubos de recolección de sangre de almacenamiento a largo plazo de cuatro fabricantes diferentes: Streck (Cell-Free DNA, Omaha, NE, EUA); Roche Diagnostics (Tubos de Recolección de ADN libre de células, (Roche, Risch-Rotkreuz, Suiza); PreAnalytiX (tubo PAXgene Blood ccfDNA, Hombrechtikon, Suiza) y Norgen Biotek Corp. (tubos de Conservación de cf-DNA/cf-RNA, Thorold, ON, Canadá), utilizando el adaptador universal para el cultivo de sangre de Sarstedt.

El grupo analizó varios biomarcadores, incluidos miR-16 y MiR-451, que actúan como marcadores de hemólisis, y miR-148b, -652, -376c y -200c, que actúan como biomarcadores para el cáncer de mama. Para las muestras almacenadas a temperatura ambiente, el equipo observó un aumento significativo en miR-148b y -652 en la mitad de las muestras después de 18 horas, lo que no ocurrió en las muestras almacenadas a 4°C. Sin embargo, el equipo descubrió que los miARN circulantes eran relativamente estables cuando se almacenaban en tubos hasta 12 horas antes de procesarlos para aplicaciones posteriores.

Mientras que el contenido total de cf-miARN permaneció estable en la sangre almacenada hasta por siete días en los tubos Streck, PAX y Norgen, el equipo notó que los tubos de Roche tenían un ligero aumento en la hemólisis después de cinco días, y luego un salto significativo en el miR- 451 después de siete días. En términos de estabilidad del cf-ADN, el equipo encontró que los tubos Norgen superaban a los otros fabricantes en la cantidad de ADN aislado. Dado que los tubos Norgen pueden extraer tanto cf-ADN como cf-miARN, los autores del estudio señalaron que los BST de otras compañías requieren que los científicos usen tubos separados para la extracción de mi-ARN, haciendo que los tubos de otras compañías sean más caros no solo financieramente sino también en términos de cantidad de muestra disponible. El estudio fue publicado el 6 de febrero de 2019 en la revista International Journal of Molecular Sciences.

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