Imagen de citometría mide concentraciones de células mononucleares

Se ha utilizado un sistema de citometría de imagen de fluorescencia para el análisis fluorescente y de campo brillante de las características celulares.

La viabilidad y la concentración de las células mononucleares aisladas de sangre la periférica (PBMC) son medidas tradicionalmente por recuento manual con azul de tripano (TB) usando un hemocitómetro, pero la contaminación con glóbulos rojos (RBC) puede ser un problema.

Científicos de los Laboratorios Nexcelom Bioscience, (Lawrence, MA, EUA) compararon su instrumento Vision Cellometer, tanto, con el recuento manual como con el método automático para medir con exactitud la concentración de las PBMC en muestras de sangre preparadas. Quince muestras, recién aisladas, fueron coloreadas con naranja de acridina y yoduro de propidio (AO/PI) para identificar la contaminación con RBC. Los cinco métodos diferentes fueron el recuento manual de PBMC coloreados con TB en un hemocitómetro, el recuento manual de las imágenes, en campo brillante, de las PBMC, el recuento manual los PBMC, teñidos con TB, después de la lisis con ácido acético de los glóbulos rojos, el recuento de automatizado de PBMC teñidos con PI después de la lisis de los RBCs con ácido acético y el método de recuento dual con AO/PI.

Cada una de las 15 muestras medidas fue clasificada como de baja, media o alta contaminación con RBC. Cinco muestras mostraron menos de 10% de contaminación con RBC, seis muestras mostraron entre 10% a 40% de contaminación con RBC y cuatro muestras mostraron contaminación con RBC mayor de 40%. Las partículas totales, contadas en campo brillante, aumentaron debido a la adición de los glóbulos rojos, mientras que la coloración AO/PI mostró una medición coherente de PBMC, que volvió a demostrar la robustez del método a pesar de contaminación con RBC. Aunque los contaminantes de RBC inherentes pueden haber existido en la muestra, el objetivo era observar la diferencia cada vez mayor entre las células nucleadas teñidas con la fluorescencia y el recuento total de células en el campo brillante, incluyendo los glóbulos rojos.

Los autores concluyeron que la citometría de imagen fluorescente puede ser utilizada para eliminar el error inducido por los RBC, en muestras de pacientes, lo que puede mejorar la exactitud y la eficiencia de la medición de PBMC. También se ha demostrado que la citometría de imagen Cellometer, con fluorescencia, es útil para el análisis de poblaciones celulares, tales como en la detección de la apoptosis, el ciclo celular y para etiquetar marcadores de superficie. El sistema puede ser utilizado para realizar la inmunofenotipificación de PBMC recogidos y puede caracterizar rápidamente muestras entrantes de los pacientes, simplificando aún más el protocolo de caracterización de los PBMC. El estudio fue publicado en la edición de febrero de 2013 de la revista Journal of Immunological Methods.

Enlace relacionado:

Nexcelom Bioscience