Mejoran análisis de flujo lateral para detecciones múltiplex

Los análisis de flujo lateral (LFA) son herramientas populares, para los puntos de atención, porque son rápidos y fáciles de usar. Sin embargo, con frecuencia, los LFA carecen de sensibilidad analítica y resultados cuantitativos y pueden ser difíciles de multiplexar, limitando su utilidad para la medición de biomarcadores.

Los científicos de SRI International (Menlo Park, CA, EUA) diseñaron un LFA multiplex, cuantitativo, con detección fácilmente disponible, en el infrarrojo cercano (NIR) para mejorar la sensibilidad analítica. Ellos construyeron y optimizaron un LFA multiplex que midió simultáneamente y con precisión la interleuquina (IL)-6 y la proteína C-reactiva (PCR), en plasma humano al 10%, en una tira de análisis.

Se conjugaron anticuerpos disponibles comercialmente con el colorante fluorescente IRDye 800CW (Li-Cor; Lincoln, NE, EUA; www.licor.com). Los investigadores utilizaron NIR-LFAs uniplex, optimizados para medir la IL-6 de 0 a 200 pg/mL y desarrollaron un análisis dúplex para medir simultáneamente la IL-6 de 0 a 100 pg/mL (0 a 4,5 pmol/L) y la PCR de 50 a 2.500 ng/mL (0,4 a 20 nmol/L) en una tira de análisis individual. Los ensayos fueron probados en 60 muestras diferentes, enriquecidas, y se compararon con los resultados de los análisis ELISA. Las relaciones de intensidad para las muestras desconocidas fueron comparadas con la curva de calibración para determinar las concentraciones de analito y las muestras fueron procesadas por cuadruplicado.

La elección de un análisis de inhibición en lugar de un ensayo de sándwich evitó las complicaciones debidas a un efecto gancho, potencial, a altas concentraciones de PCR. Con este método, la PCR libre, presente en la muestra, inhibió la unión del anticuerpo conjugado con el colorante a la PCR colocada en la membrana. A medida que la concentración de PCR en la muestra aumentaba, la señal disminuía directamente. El NIR-ALF detectó la IL-6 en una matriz de 10% de plasma, con un límite de detección de 4 pg/mL (182 fmol/L). El NIR-LFA dúplex midió cuantitativamente las concentraciones de IL-6 y de PCR, de forma simultánea. Los valores se correlacionaron fuertemente con mediciones de ELISA, con valores de regresión lineal R2 de 0,9825 y 0,9711 para la IL-6 y la PCR, respectivamente.

Los autores concluyeron que los NIR-LFA muestran una medición cuantitativa en concentraciones de pg/mL debido a una relación alta señal-a-fondo y una depuración robusta de detección de anticuerpos en la tira de análisis. Además, los NIR-LFA son capaces de detectar las moléculas presentes en varias concentraciones diferentes en formato multiplex y se compararon favorablemente con los ELISA. Las LFAs con detección directa NIR pueden ser una herramienta valiosa para la evaluación de biomarcadores en los puntos de atención. El estudio fue publicado, el 30 de enero de 2013, en la revista Clinical Chemistry.

Enlaces relacionados:

SRI International

Li-Cor