Expresión de proteínas de CTC emplea transferencia Western con microfluidos

Las células tumorales circulantes (CTC) son células tumorales raras que se encuentran en el sistema circulatorio de ciertos pacientes con cáncer; la importancia clínica y funcional de las CTC está todavía bajo investigación.

 

Se han aislado células tumorales circulantes de la sangre de los pacientes con cáncer de mama y, a continuación, y se ha utilizado la microescala física para diseñar una prueba de precisión para biomarcadores de proteínas, que son indicadores de cáncer.

 

Los científicos de la Universidad de California, Berkeley (CA, EUA) reclutaron a 12 pacientes con cáncer de mama avanzado y extrajeron y procesaron sangre en un plazo de cinco horas después de la recolección. Los glóbulos blancos se prepararon mediante la lisis de los glóbulos rojos. Se usaron inmunotransferencias western de resolución de una célula (scWB) para medir un panel de proteínas en las CTC individuales, aisladas de pacientes con cáncer de mama primario, positivas para el receptor de estrógenos (ER+).

 

Se utilizó una herramienta microfluídica, comercialmente disponible (Vortex Biosciences, Menlo Park, CA, EUA), para el aislamiento, sin etiquetas, de las células cancerosas circulantes en experimentos de muestras de sangre a la que se le agregó células de cáncer y de pacientes con cáncer. Se realizó un análisis de citometría de flujo y se analizaron las células en un citómetro de flujo Guava (MilliporeSigma, Billerica, MA, EUA). 

 

Los científicos descubrieron que el manejo y el análisis de precisión, revelaron una capacidad para analizar las CTCs obtenidas de pacientes con escasa disponibilidad, , un fenotipo de CTC biofísico más resistente a la lisis que las líneas celulares de cáncer de seno. Se demostró una capacidad para informar la expresión de la proteína sobre una base por CTC y dos subpoblaciones de gliceraldehído 3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH), estadísticamente diferentes, dentro de las CTC derivadas de las pacientes. Al clasificar y probar los objetivos de proteínas, la prueba es más selectiva que las herramientas de patología existentes. La selectividad mejorada será crucial en la detección de modificaciones químicas sutiles a los biomarcadores que pueden ser importantes pero difíciles de medir.

 

Amy E. Herr, PhD, una profesora y autora principal del estudio, dijo: “El diseño de los microfluidos fue clave en este estudio. Hemos sido capaces de integrar las características necesarias para cada etapa de medición en un proceso. La integración de sistemas nos permitió realizar cada paso de medida muy, muy rápidamente, mientras que los biomarcadores todavía están concentrados. Si no se realiza de forma excepcionalmente rápida, las proteínas de las células se difunden y se vuelven indetectables”. El estudio fue publicado el 23 de marzo de 2017, en la revista Nature Communications.