Dispositivo integrado combina técnicas para detectar la malaria

La amplificación de la recombinasa polimerasa (RPA) es prometedora para desarrollos adicionales ya que funciona en un corto período de tiempo y da como resultado un producto que puede ser detectado visualmente en una tira reactiva de flujo lateral.

 

Las técnicas de amplificación isotérmica se están convirtiendo en un método prometedor para el diagnóstico de la malaria, ya que son capaces de detectar concentraciones extremadamente bajas del parásito objetivo al tiempo que mitigan las necesidades de infraestructura y de capacitación, requeridas por otras pruebas a base de ácidos nucleicos.

 

Bioingenieros de la Universidad Rice (Houston, TX, EUA) desarrollaron un dispositivo integrado capaz de llevar a cabo la amplificación isotérmica usando la reacción RPA, la dilución posterior a la amplificación y la detección de flujo lateral del producto resultante. El dispositivo de papel y plástico desarrollado amplifica el objetivo utilizando RPA; diluyó el producto resultante; y detectó el producto usando un ensayo de sándwich de flujo lateral. Además, el dispositivo transfiere el producto entre los módulos de amplificación, de dilución, y detección. Una secuencia de blocs de papel cargados con diversos reactivos fue utilizado para llevar a cabo estas funciones.

 

El dispositivo está hecho de componentes simples, puede ser ensamblado por el usuario y utiliza un método deslizante novedoso para el transporte de reactivos a través del sistema. El equipo necesario, más allá del propio dispositivo, y la muestra a ensayar es una lámina caliente capaz de dar una temperatura de 37°C, una pesa de metal reutilizable de 25 gramos, la mezcla maestra para la RPA, el tampón de funcionamiento/dilución y pipetas para cargar estos reactivos en el dispositivo de dilución, tampón de arrastre, RPA y almohadillas de muestra. Este dispositivo procesa todo el análisis, incluyendo la detección, en alrededor de una hora y tiene un límite de detección equivalente a cuando el ensayo se está realizando usando métodos convencionales en el mesón de trabajo. El tiempo total de ejecución para el dispositivo es de 55 minutos, e incluyendo la carga y el funcionamiento del dispositivo, todo el ensayo se puede llevar a cabo en aproximadamente una hora.

 

Los autores concluyeron que el dispositivo fabricado amplificó una secuencia, que es común a las especies infecciosas para el hombre de Plasmodium y operó una reacción de amplificación isotérmica, que es rápida y tiene una lectura visual fácil. También se desarrolló un dispositivo de papel y plástico que lleva a cabo la amplificación de las muestras, diluye el producto y muestra el resultado en una tira de flujo lateral. Cuando fue ensayada en objetivos sintéticos, se encontró un límite de detección de 5 copias/µL (50 copias en total), que coincide con el desempeño del mismo análisis procesado en el mesón. El estudio fue publicado el 26 de noviembre de 2015, en la revista Malaria Journal.

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