Ensayo múltiplex genotipifica 35 antígenos eritrocitarios

Se diseñó un análisis múltiplex de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para la tipificación de 35 antígenos de glóbulos rojos (GR) en seis mezclas de reacción.

El análisis de alto rendimiento será utilizado para la detección de un gran número de donantes por genotipificación en lugar de efectuar pruebas serológicas para una variedad de antígenos, lo cual es costoso y debido a la escasez de reactivos, también limita el procedimiento.

Científicos de la Universidad Médica de Viena (Austria) validaron el ensayo con 370 muestras seleccionadas tipificadas serológicamente. Posteriormente 6.000 individuos fueron analizados para identificar los donantes negativos para el antígeno de alta frecuencia (HFA) y facilitar la búsqueda de sangre compatible para pacientes aloinmunizados.

Eligieron una PCR cualitativa convencional y determinaron 35 genotipos, llevados a cabo en seis mezclas de reacción multiplex que consisten en un máximo de siete objetivos de amplificación diferentes por cada mezcla. Los productos de PCR se analizaron posteriormente mediante electroforesis en gel de agarosa. El análisis también detecta genotipos relacionados con 12 antígenos de alta frecuencia (HFA). Se incluyeron polimorfismos de nucleótido sencillo (SNP), de alta incidencia en cada reacción de PCR para servir como controles internos. Mediante la combinación de dos o tres alelos relacionados con la HFA con alelos de frecuencia baja o promedio en una mezcla de reacción, los resultados en el gel están claramente separados por las líneas o la cuadrícula de las bandas de alta frecuencia y pueden fácilmente ser interpretados.

El examen reveló 55 donantes con un raro tipo de sangre. Estas personas carecían de uno de los 12 antígenos de alta incidencia de la prueba. Se identificaron nueve donantes que fueron negativos para el sistema Luterano 2 (LU2), cinco negativos para LU8, cinco negativos para el sistema Kell 2 (KEL2), uno negativo para KEL4, 24 negativos para YT (‘Cartwright’) 1 (YT1) y 11 individuos negativos para Colton 1 (CO1). Los resultados fueron confirmados siempre por serología. En todos los casos, hubo concordancia entre las pruebas serológicas y el resultado de la PCR. El examen de 6.000 donantes reveló 57 nuevos donantes negativos para HFA y la base de datos del grupo sanguíneo se extendió en aproximadamente 210.000 resultados.

Los autores concluyen que su método para la genotipificación de donantes sanguíneos de glóbulos rojos es una alternativa viable para otros tipos de tipificación de alto rendimiento de donantes de glóbulos rojos. A pesar de algunas limitaciones, se puede implementar en la mayoría de los centros de sangre con inversiones razonables. El uso de este método podría ser una estrategia para llenar el vacío hasta cuando técnicas de mayor resolución, tales como la tecnología de micropaneles, estén disponibles a un precio asequible. El estudio fue publicado en la edición de abril de 2012 de la revista Vox Sanguinis.

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Medical University of Vienna