Desarrollan métodos ELISA para análisis de inmunoterapia

Se ha desarrollado un nuevo ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) con alta sensibilidad y selectividad para el bioanálisis de bevacizumab (BEV), un anticuerpo monoclonal utilizado para la inmunoterapia de diferentes tipos de cáncer.

El bevacizumab es un anticuerpo monoclonal humanizado recombinante dirigido contra el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), una citoquina que promueve la angiogénesis. El bevacizumab se une al VEGF e inhibe la unión al receptor de VEGF, lo que impide el crecimiento y el mantenimiento de los vasos sanguíneos de los tumores.

Científicos de la Universidad Rey Saud (Riyadh, Arabia Saudita) capturaron el BEV mediante el antígeno humano de la proteína específica del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF); y la inmovilizaron en una placa de ensayo de 96 pozos. Se cuantificaron los complejos BEV-VEGF formados en los pozos de la placa usando inmunoglobulina-G antihumana marcada con peroxidasa de rábano picante (HRP-IgG) y 3,3 ', 5,5`-tetrametilbenzidina (TMB) como sustrato cromogénico para la enzima peroxidasa.

Se establecieron las condiciones óptimas para llevar a cabo el ELISA propuesto y se evaluó su desempeño analítico según las pautas para la validación de inmunoensayos para el bioanálisis de anticuerpos monoclonales terapéuticos. El límite de detección del ensayo fue de 1,01 ng/mL y el intervalo dinámico efectivo de trabajo fue de 3,07 a 100 ng/mL. Se demostraron la exactitud y la precisión del análisis. El presente ensayo con un análisis de alto rendimiento fue muy fácil de realizar en una placa de 96 pozos y permite a un operador analizar un lote de aproximadamente 200 muestras, por triplicado. Esto facilita el procesamiento de una gran cantidad de muestras en los entornos clínicos. El uso del análisis ELISA eliminó la necesidad de realizar el pretratamiento de las muestras de plasma mediante cromatografía de afinidad o a través de otro sistema sofisticado.

Los autores también han desarrollado un ensayo similar para el cetuximab (CET) en muestras de plasma humano. El CET fue capturado por el antígeno específico de la proteína del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) e inmovilizada en una placa de análisis de 96 pozos. El complejo CET-EGFR formado en los pozos de la placa se cuantificó usando la enzima fosfatasa alcalina marcada con IgG antihumana (ALP-IgG) y sustrato de fosfato de para-nitrofenilo (pNPP) como sustrato cromogénico, para la enzima fosfatasa alcalina. El límite de detección del ensayo fue de 1,5 ng / mL y el intervalo dinámico efectivo de trabajo fue de 0,005-6,25 μg / mL. Los estudios se publicaron el 31 de enero de 2018 en la revista Current Pharmaceutical Analysis.