Prueba nueva de flujo lateral es más económica, fácil de usar y tan confiable como la prueba de PCR para diagnosticar la infección por el SARS-CoV-2

Una prueba de flujo lateral de SARS-CoV-2, que combina dos enzimas bacterianas con secuencias genéticas y un par de sondas, es más barata y fácil de usar que las pruebas de PCR, al tiempo que produce resultados comparativamente confiables.

Llamada Vigilant y diseñada en la Universidad de Ciencia y Tecnología Rey Abdullah (KAUST; Thuwal, Arabia Saudita), la prueba puede detectar cantidades muy pequeñas de ARN viral en una muestra. Las pruebas de PCR, que se realizan en laboratorios, producen resultados más confiables, pero son costosas y requieren equipos sofisticados y personal capacitado.

El primer paso crítico de la plataforma Vigilant involucra una técnica llamada amplificación de la polimerasa recombinasa con transcripción inversa (RT-RPA) para hacer muchas copias de una región específica en el genoma del SARS-CoV-2, si esta existe en el frotis de nariz y garganta de la muestra de una persona. Las pruebas de PCR también amplifican las secuencias de genes virales en las muestras, pero implican someter las muestras a múltiples ciclos de alta y baja temperatura. La RT-RPA se puede realizar a temperatura ambiente con equipos mucho más baratos y fáciles de usar.

Todos los genes amplificados del SARS-CoV-2 en el producto de este proceso se etiquetan con una molécula llamada biotina y luego se agregan a un tubo de ensayo que contiene el complejo de detección especialmente diseñado por KAUST. Este complejo está formado por dos enzimas. En un extremo, una enzima bacteriana llamada Cas9 se conjuga con una guía de ARN que solo reconoce y se une a la secuencia del gen SARS-CoV-2 correspondiente. En el otro extremo, otra enzima bacteriana llamada VirD2 se une a una secuencia de nucleótidos marcada con fluorescencia.

Las gotas de la reacción entre el complejo y el producto RT-RPA se agregan luego a una tira de prueba de flujo lateral impregnada con una proteína, que reconoce la biotina, llamada estreptavidina en un extremo y un anticuerpo que reconoce la sonda fluorescente en el otro. Si la muestra contiene secuencias del gen SARS-CoV-2, se habrán unido al complejo VirD2-Cas9. Se produce un resultado positivo cuando aparecen dos líneas visibles. La primera línea es donde la biotina del amplicón del SARS-CoV-2 se une a la estreptavidina. La segunda línea es donde la etiqueta fluorescente en el otro extremo del complejo se adhiere al anticuerpo de la tira. Un resultado negativo se muestra solo como una sola línea causada por la unión de la etiqueta fluorescente al anticuerpo.

“Actualmente hay varios tipos de pruebas de flujo lateral disponibles o en investigación para detectar el SARS-CoV-2”, dijo el estudiante de Ph.D., en KAUST, Tin Marsic. “Dependiendo de cómo funcionen, todas tienen desventajas, incluida la detección del virus solo varios días después de la infección o la producción de resultados falsos positivos y falsos negativos. Vigilant se puede realizar en entornos que no son de laboratorio y es significativamente más barata y fácil de usar que las pruebas de PCR”.

“Ahora trabajamos para hacer que nuestra plataforma Vigilant sea más fácil de usar combinándola con una técnica de amplificación aún más simple”, agregó Magdy Mahfouz, bioingeniero de KAUST, quien dirigió la investigación. “También trabajamos en la producción de otras pruebas de diagnóstico rápidas y eficientes que puedan detectar ácidos nucleicos con el fin de permitir pruebas en el lugar de atención para patógenos, incluidos virus y marcadores de enfermedades”.

Enlace relacionado:
Universidad de Ciencia y Tecnología Rey Abdullah (KAUST)