La PCR digital mejora la detección de BCR-ABL1 en la leucemia mieloide crónica

El direccionamiento específico de la enzima Bcr-Abl1 por los inhibidores de la tirosina quinasa (TKI) revolucionó el tratamiento de la leucemia mieloide crónica (LMC), hasta el punto de que los TKI pueden ofrecer una esperanza de vida casi normal para los pacientes con LMC.

Sin embargo, algunos pacientes con LMC no logran una respuesta óptima en momentos de tratamiento definidos y otros incluso desarrollan resistencia a los inhibidores de la tirosina quinasa. Por tanto, la monitorización molecular es fundamental para el tratamiento clínico de la LMC. La PCR digital (dPCR) ofrece alta reproducibilidad, precisión y mayor sensibilidad para la detección de objetivos raros.

Científicos médicos de diversas disciplinas de la Universidad de Masaryk (Brno, República Checa) realizaron un análisis retrospectivo de 70 muestras clínicas de pacientes con LMC en fase crónica y 15 muestras de voluntarios sanos utilizadas como controles negativos de BCR-ABL1. La cuantificación por transcripción inversa (RT-qPCR) de BCR-ABL1 en células K562 se realizó en un sistema de PCR en tiempo real 7300 de Applied Biosystems (Waltham, MA, EUA). Se utilizó la prueba Xpert BCR-ABL Monitor (Cepheid, Sunnyvale, CA, EUA) para la cuantificación de BCR-ABL1 en muestras clínicas de LMC. Todas las mediciones de dPCR se realizaron en el sistema de PCR digital por gotitas QX200 (Bio-Rad, Hercules, CA, EUA).

Los investigadores informaron que, a pesar de la correlación general de las proporciones, observaron diferencias significativas en la cuantificación del número de copias entre la RT-qPCR y la dPCR. En las muestras que contenían altos niveles de transcripción (10% –0,1% BCR-ABL1IS), la RT-qPCR detectó significativamente más copias de BCR-ABL1 que la dPCR (P <0,0001). Por el contrario, en la muestra con niveles bajos de transcripción (0,0032% de BCR-ABL1IS), la RT-qPCR cuantificó significativamente menos copias de BCR-ABL1 en comparación con las dPCR. Además, en todas las categorías de muestras, la dPCR detectó significativamente menos copias de ABL1. Un total de 44 pacientes con LMC, monitoreados de forma rutinaria por GeneXpert, fueron evaluados por dPCR. El equipo observó diferencias significativas en las proporciones medidas por dPCR y GeneXpert en los 36 pacientes con niveles bajos de transcripción (≤0,1% BCR-ABL1IS), lo que también se tradujo en una baja correlación entre los métodos.

Los autores concluyeron que su estudio demostró que la dPCR en gotitas, probada con ensayos EAC estándar, proporcionó un límite de detección de más de tres copias/muestra de BCR-ABL1, que correspondía a la sensibilidad de los métodos cuantitativos convencionales. No obstante, la dPCR clasificó a más del 50% de los pacientes con LMC en diferentes categorías de RM en comparación con la GeneXpert cuantitativa. El estudio fue publicado en la edición de mayo de 2021 de la revista Practical Laboratory Medicine.

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