Desarrollan prueba de proliferación viral para el VIH latente

Se ha señalado el desarrollo de un análisis más sencillo para el depósito latente del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) como una prioridad importante en el estudio del síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA).

Se ha desarrollado una prueba rápida del crecimiento viral que utiliza una novedosa técnica molecular cuantitativa y permite cuantificar la frecuencia de células que pueden liberar virus competentes para la replicación después de la activación celular.

Científicos de la Facultad de Medicina de la Universidad Johns Hopkins (Baltimore, MD, EUA) inscribieron en un estudio a 20 pacientes infectados con VIH-1 y aislaron células mononucleares de sangre periférica (PBMC) mediante centrifugación con gradiente de densidad. Las muestras fueron enriquecidas, en linfocitos T CD4+, por agotamiento negativo. Para cada paciente, se realizaron análisis tanto de proliferación viral estándar como de proliferación viral MOLT-4/CCR5 utilizando linfocitos T CD4+ en reposo, recién purificados, obtenidos de una única muestra de sangre. Las muestras se enriquecieron aún más en linfocitos T CD4+ en reposo mediante el agotamiento negativo de las células utilizando microesferas específicas (Miltenyi Biotec, Auburn, CA, EUA).

El ADN complementario (ADNc) fue sintetizado a partir del ARN aislado del VIH-1 utilizando el Sistema para síntesis SuperScript III First-Strand (Invitrogen, Grand Island, NY, EUA) con cebadores oligo-dT. El análisis emplea para la detección de virus, una novedosa reacción en cadena de polimerasa con transcripción inversa cuantitativa (RT-PCR), específica para el ARN del VIH-1 poliadenilado, logrando así un método más sensible y más rentable para detectar la replicación del VIH-1 que los métodos comerciales más costosos para detección mediante análisis ELISA.

En promedio, la proliferación viral, desde un depósito latente, fue detectable en condiciones semejantes a las del análisis de proliferación viral MOLT-4/CCR5, con el análisis de RT-PCR específico para VIH-1, después de seis días, frente a 10 días del ELISA para el antígeno p24 del VIH-1. No hubo diferencia significativa entre la frecuencia de la infección latente de células T CD4+ en reposo, cuando se midió al séptimo día utilizando la RT-PCR específica para el VIH-1 y en el día 14 con el ELISA para el antígeno p24 del VIH-1. La utilización de una medición de la proliferación del VIH-1 mediante RT-PCR no sólo permite una detección más sensible de la replicación viral, sino que también permitirá un mayor rendimiento en la medición de la replicación del VIH-1.

Los autores llegaron a la conclusión de que el análisis MOLT-4/CCR5, con la utilización del análisis de proliferación viral es el análisis más rápido y escalable disponible para medir el tamaño del depósito latente de VIH-1. Por lo tanto, creen que este análisis será una herramienta indispensable para evaluar el éxito de las estrategias de tratamiento para reducir o erradicar el reservorio latente del VIH-1. El estudio fue publicado el 30 de mayo de 2013 en la revista Public Library of Science Pathogens.

Enlaces relacionados:

Johns Hopkins University School of Medicine

MiltenyiBiotec

Invitrogen