Análisis molecular detecta hongos patógenos

Un análisis con reacción en cadena de la polimerasa detecta y diferencia hongos dimórficos de aislado de los cultivos y directamente de las muestras clínicas.

Se diseñaron cebadores y sondas de hibridización de transferencia de energía de resonancia fluorescente para identificar genes específicos de Blastomyces dermatitidis e Histoplasma capsulatum, dos hongos patógenos que pueden causar micosis severas.

Los científicos de la Clínica Mayo (Rochester, MN, EUA) recogieron 797 muestras clínicas de pacientes con sospecha de infección por hongos, durante un período de 12 meses, que fueron analizadas inmediatamente. Se diseñaron cebadores y sondas de hibridización de transferencia de energía de resonancia fluorescente (FRET) para una región de 174 pares de bases (pb), del gen de la histidina quinasa que regula el dimorfismo (DRK-1) de B. dermatitidis y una región de 192 pb del gen de la gliceraldehído -3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH), de H. capsulatum. También su cultivaron muestras respiratorias, tales como lavados bronquiales y líquido broncoalveolar y pleural.

El ensayo de PCR en tiempo real fue desarrollado en el instrumento LightCycler 2.0 (Roche Applied Sciences, Indianápolis, IN, EUA). Se determinó la sensibilidad analítica en 100 copias/mL de B. dermatitidis e H. capsulatum. A partir de aislamientos de cultivo, el ensayo demostró 100% de especificidad y sensibilidad del 100% para B. dermatitidis y una especificidad del 100% y sensibilidad de 94% para H. capsulatum. La detección directa de 797 muestras clínicas demostró especificidades y sensibilidades del 99% y 86% para B. dermatitidis y 100% y 73% para H. capsulatum en comparación con los resultados del cultivo. No hubo reactividad cruzada con otros hongos patógenos y la prueba pudo detectar y diferenciar B. dermatitidis y H. capsulatum directamente de muestras clínicas en un lapso de unas cuatro horas, a partir de la recepción de la muestra.

Aunque el cultivo microbiológico es un método estándar para detectar estos patógenos, su recuperación puede requerir días o semanas, y la manipulación de cultivos presenta un riesgo de seguridad significativo para el personal de laboratorio. Los autores concluyeron que el ensayo de PCR, en tiempo real, ofrece un método rápido, sensible y específico para la detección y diferenciación de B. dermatitidis e H. capsulatum, a partir de aislados de cultivo y muestras clínicas. Una ventaja adicional de la prueba de PCR en tiempo real es mayor seguridad para el personal de laboratorio reduciendo de la necesidad de manipular los cultivos de muestras que son positivas por el ensayo de PCR. El estudio fue publicado en septiembre de 2011, en la revista Journal of Clinical Microbiology.


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