Ensayo molecular cuantifica carga viral del virus de Epstein-Barr

Son esenciales pruebas exactas y altamente sensibles para el diagnóstico de la infección activa por el virus de Epstein-Barr (VEB), para el manejo clínico de las personas infectadas con el virus.

Se desarrolló un ensayo calibrado, en tiempo real, de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para la medición del VEB ADN, de ambos subtipos VEB-1 y 2, combinando la detección del ADN del VEB y de un calibrador de ADN sintético en un formato de PCR múltiplex.

Científicos en el Instituto Científico San Raffaele (Milán, Italia) desarrollaron un ensayo cuantitativo en tiempo real de PCR y validaron clínicamente el método. Varias cohortes de individuos, incluyendo pacientes con enfermedades asociadas con el VEB obtenidos a partir de diferentes áreas geográficas fueron reclutadas y analizadas. La sensibilidad y especificidad clínicas del sistema fueron evaluados mediante pruebas a 181 muestras de células mononucleares de sangre periférica (CMSP) y muestras de plasma obtenidas de 21 pacientes sometidos a trasplante de médula ósea, 70 sujetos seropositivos al VIH y 23 controles sanos.

La optimización de las reacciones se logró mediante la determinación de las concentraciones de los cebadores y de las sondas, así como la temperatura de hibridación dando la mayor intensidad de la señal fluorescente reportada, sin una reducción de la especificidad o sensibilidad. Esto se logró utilizando el mezclador maestro Absolut qPCR ROX (ABgene; Epsom, Reino Unido). El ensayo muestra un rango dinámico amplio y un alto grado de exactitud, incluso en presencia de 1 μg de ADN genómico humano. Este ensayo mide con la misma eficiencia el ADN del VEB de cepas prevalentes en diferentes áreas geográficas. Los pacientes afectados por trastornos postrasplante linfoproliferativos asociados al VEB tuvieron la mayor frecuencia de detección de VEB y la mayor carga viral. Las personas infectadas con el VIH tenían mayores niveles de carga de ADN del VEB en las CMSP y una mayor frecuencia de viremia VEB en comparación con los controles sanos.

Los autores concluyeron que este nuevo ensayo proporciona un método confiable y de alto rendimiento para la cuantificación de ADN del VEB en muestras clínicas. La técnica, en tiempo real, de PCR calibrada ofrece a los médicos un método rápido y fiable para el establecimiento de un vínculo causal entre el VEB y las enfermedades humanas, así como para controlar el riesgo de desarrollar neoplasias asociadas al VEB y la eficacia de los métodos terapéuticos contra la infección por VEB. El estudio fue publicado en el número de diciembre de 2011 de la revista Journal of Virological Methods.

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San Raffaele Scientific Institute

ABgene