Análisis molecular detecta el norovirus en muestras de heces

Se ha evaluado un análisis nuevo de reacción en cadena de la polimerasa, en tiempo real, de transcripción reversa para la detección del Norovirus humano en muestras de heces.

Los norovirus son un grupo genéticamente diverso de virus, sin envoltura, de ácido ribonucleico de cadena sencilla (ARN), de la familia Caliciviridae y se clasifican en cinco genogrupos por el análisis filogenético de la proteína de la cápside, de los cuales los genogrupos II (GII), I (GI), y IV (GIV) son responsables de los brotes en humanos.

Los científicos del Colegio Universitario de Medicina Hallym (Seúl, Corea del Sur) analizaron 281 suspensiones fecales (10% a 20% de muestras fecales diluidas con solución salina) recogidas y almacenadas a -70°C, entre agosto de 2010 y abril de 2011. Estos comprendieron 109 muestras positivas para Norovirus y 172 muestras negativas de heces para Norovirus, de acuerdo a la determinación utilizando un ELISA para Norovirus.

El ARN se extrajo a partir de suspensiones fecales y fue preparado utilizando el QIAamp Viral RNA Mini Kit (Qiagen; Hilden, Alemania) y la plataforma Qiagen QIAcube. El análisis AccuPower Norovirus Real-time RT-PCR (Bioneer Corporation; Daejeon, Corea del Sur) y el análisis RIDAGENE Norovirus V (R-Biopharm, Darmstadt, Alemania) fueron comparados como ensayos de Norovirus. La positividad para el Norovirus y el genotipo fueron confirmados por secuenciación directa.

De las 109 muestras positivas para Norovirus por ELISA; 91 (83,5%) dieron resultados positivos con los dos kits de PCR y dos (1,8%) dieron un resultado positivo solamente con el kit AccuPower, mientras que 16 casos (14,7%) dieron resultados negativos con ambos kits de PCR. De las 172 muestras negativas para Norovirus por ELISA, 159 (92,4%) dieron resultados negativos y cinco (2,9%) dieron resultados positivos con ambos kits de PCR; una (0,6%) fue positiva utilizando el kit RIDAGENE y siete (4,1%) dieron resultados positivos con el kit AccuPower. Los números promedios más bajos de copias genómicas de GI y GII que se pudieron detectar por el análisis AccuPower fueron 12,3 y 5,6 copias de ARN/reacción, respectivamente.

Los autores llegaron a la conclusión de que el kit AccuPower Norovirus Real-time RT-PCR Kit mostró un buen desempeño analítico y clínico, incluyendo una sensibilidad analítica excelente y reproducibilidad, sin presentar reactividad cruzada y recomendaron este sistema de análisis como una herramienta de diagnóstico eficiente para la infección por Norovirus. Los norovirus son responsables por aproximadamente 218.000 muertes cada año entre los niños menores de cinco años en los países en desarrollo y generan 1,1 millones de hospitalizaciones en todo el mundo. El estudio fue publicado en la edición de enero 2014 de la revista Diagnostic Microbiology and Infectious Disease.

Enlaces relacionados:

Hallym University College of Medicine

Qiagen

Bioneer Corporation

R-Biopharm