Novedoso método para seguimiento de células-T en pacientes con VIH

La determinación del período de vida preciso de una célula T humana es retadora debido a la incapacidad de las técnicas estándar para diferenciar entre las células en división y moribundas.

La duración de la persistencia in vivo se puede medir siguiendo un grupo de células T que habían sido marcadas naturalmente con un sólo clon integrado de un virus de la inmunodeficiencia humana incompetente para la replicación (VIH-1), llamado un provirus.

Científicos del Instituto Nacional de Alergias y Enfermedades Infecciosas (Bethesda, MD, EUA) han descubierto un nuevo método para el seguimiento de las células T del grupo de diferenciación 4 (CD4+) en las personas infectadas con el VIH. Las células T CD4+ son fundamentales para la defensa inmune contra una gran variedad de agentes patógenos y son un blanco principal del VIH. Ellos utilizaron una combinación de técnicas para secuenciar/mapear un sitio de integración de un provirus único con un codón de parada en la posición 42 de la proteasa del VIH-1. El virus defectuoso se había integrado en el genoma de una sola célula T CD4+.

La reconstrucción in vitro de este provirus en un clon infeccioso confirmó su incapacidad para replicar. Cuando se combinaron las técnicas de separación celular y la integración de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) específica del sitio, fueron capaces de seguir el destino de este único provirus en varios subconjuntos de células T por un período de 20 años. Como controles, también se secuenciaron y se analizaron un número de provirus integrados adicionales con el ABI PRISM 3130xl Genetic Analyzer (Applied Biosystems; Foster City, CA, EUA).

Este método innovador les permite a los científicos diferenciar a las células en división de las células moribundas, algo que no ha sido posible con las técnicas de marcaje existentes, pero que es esencial para el estudio de cómo las células inmunes sobreviven a la infección por el VIH. El provirus incompetente para la replicación del VIH-1 fue el único que se encontraba en la reserva de las células T CD4+ de memoria efectora (EM), durante 17 años. El porcentaje de las células T totales CD4+ EM que contenían el provirus incompetente para la replicación alcanzó un máximo de 1% con una vida media funcional de 11,1 meses. En el proceso de la secuenciación de múltiples provirus, también observaron altos niveles de mutaciones letales en grupo de provirus en sangre periférica.

Los científicos también observaron en las células sanguíneas de los pacientes una mayor frecuencia de provirus de VIH defectuosos de lo que se ha informado en anteriores trabajos. Aunque estas variantes defectuosas no pueden producir un virus infeccioso, muchos conservan la capacidad para generar pequeñas piezas de VIH, conduciendo a los investigadores a especular que estos “materiales extraños” dentro de las células T CD4+ pueden jugar un papel clave en la activación inmune en curso que es característica de la infección por el VIH, incluso en pacientes con el virus indetectable en su sangre. El estudio fue publicado el 31 de enero de 2014, en la revista AIDS.

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National Institute of Allergy and Infectious Diseases

Applied Biosystems