Desarrollan prueba portátil de ADN para el VIH

Se está desarrollando una prueba para detectar signos del virus de inmunodeficiencia humana(VIH) y su progreso en pacientes, en sitios con pocos recursos, usando la técnica de amplificación de polimerasa recombinante.

El estándar de oro actual para diagnosticar el VIH en bebés y monitorizar la carga viral depende de equipo de laboratorio y conocimiento técnico generalmente disponible únicamente en clínicas, mientras que el análisis nuevo es una prueba basada en ácidos nucleicos que se puede realizar en el sitio de atención.

Los bioingenieros de la Universidad de Rice (Houston, TX, EUA), desarrollaron una nueva técnica que podría sustituir a un procedimiento complejo basado en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) con uno que se basa en la RPA, un método que amplifica, rápidamente, marcadores genéticos que se encuentran en la sangre, a niveles en los que se pueden contar fácilmente. En el ensayo, que el equipo llamó RPA cuantitativa (qRPA), se escoge y se marca, con sondas fluorescentes que se pueden ver, una secuencia específica de ADN del VIH y se cuantifica usando una máquina portátil. El análisis mediante software del ADN fluorescente les permite a los médicos determinar con gran exactitud si el virus está presente en la sangre del paciente y/o la cantidad que hay.

La amplificación y la recolección de datos en tiempo real fueron realizados en una máquina CFX96 Tiempo real qPCR (Bio-Rad, Hércules, CA, EUA). Los experimentos preliminares de RPA detectando el ADN del VIH-1 y la secuencia del ADN del control positivo interno (IPC) en reacciones separadas, demostraron que el tiempo en el que comienza la amplificación detectable, aumenta con la disminución de la concentración de ADN, lo que sugiere que la cuantificación de ADN con RPA es factible. El ensayo potencialmente podría ser optimizado para una mayor exactitud mediante la recopilación de datos de fluorescencia con más frecuencia o disminuyendo la velocidad de reacción ya sea por la disminución de la concentración de acetato de magnesio en la reacción de amplificación o realizando la reacción a una temperatura inferior.

Este ensayo fue diseñado para uso con un lector de fluorescencia, de bajo costo, de punto de cuidado, tal como el fluorómetro, en tiempo real, portátil, disponible comercialmente, Twista (TwistDx, Ltd.; Cambridge, Reino Unido) o el escáner de tubos ESEQuant (Qiagen, Valencia, CA, EUA). Para ser clínicamente viable, una prueba basada en ADN para el VIH tiene que ser capaz de cuantificar la carga viral en más de cuatro órdenes de magnitud, desde muy baja a muy alta; los científicos informaron que la prueba qRPA cumple con creces esta meta. El estudio fue publicado el 26 de mayo de 2014, en la revista Analytical Chemistry.

Enlaces relacionados:

Rice University

Bio-Rad

TwistDx Ltd

Qiagen