Desarrollan análisis LAMP para la trichomoniasis

Se desarrolló un análisis de amplificación isotérmica de ácidos nucleicos (LAMP, por sus siglas en inglés) dirigido contra una secuencia repetida de especie en el ADN, para la detección de Trichomonas vaginalis, el agente causante de la trichomoniasis

Las pruebas de diagnóstico de laboratorio más comunes para las infecciones por T. vaginalis incluyen microscopía en montaje húmedo; los cultivos y, recientemente, las pruebas de amplificación de ácidos nucleicos (NAAT) utilizando muestras de hisopos genitales, orina o de semen. El cultivo es el estándar de oro para el diagnóstico de T. vaginalis, aunque su sensibilidad puede ser tan baja como la de las microscopía, y requiere al menos una semana de incubación y microscopía diaria para obtener un desempeño óptimo.

Parasitólogos de la Universidad de las Filipinas (Manila, Filipinas) recogieron un total de 16 hisopos genitales y dos muestras de orina de mujeres que acudieron a un Centro de Salud y de Bienestar Reproductivos. Los cultivos de T. vaginalis axémicos en la fase log-media (107 trichomonas/mL) y un mL de alícuota de las muestras clínicas fueron concentrados en una bolita, por centrifugación. Todas las muestras fueron examinadas en busca de la presencia de T. vaginalis por reacción en cadena de la polimerasa (PCR).

Los cebadores LAMP específicos para T. vaginalis fueron diseñados con base en un fragmento de ADN de dos de kilo-bases de pares (2 kpb) repetidos de T. vaginalis. Los productos LAMP fueron evaluados por electroforesis en gel, por evaluación de la turbidez, y la adición de la Coloración SYBR Safe DNA Gel (Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA) y fueron visualizados bajo un transiluminador ultravioleta (UVP, Upland, CA, EUA). Un cambio de color de naranja-a-rosa a la luz natural o una señal opaca a fluorescente bajo el transiluminador UV indicaron una reacción positiva.

De las 16 muestras de frotis genitales, 15 fueron negativas por PCR, y las dos muestras de orina también fueron negativas. Todas las muestras negativas fueron mezcladas y se utilizaron para adicionarlas para la evaluación de sensibilidad analítica. En muestras de hisopos genitales adicionadas, los resultados indican que el límite de detección del método LAMP fue de 100 trichomonas/mL o una trichomona, ya sea por electroforesis en gel, turbidez, o adición de SYBR Safe, mientras que el límite de detección de la PCR fue 103 trichomonas/mL o 1000 trichomonas. La LAMP para T. vaginalis no mostró reactividad cruzada con extractos de ADN de trichomonas estrechamente relacionados, Trichomonas tenax y Pentatrichomonas hominis, y otros microorganismos entéricos y urogenitales, Entamoeba histolytica, Candida albicans, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aureus.

Los autores concluyeron que el ensayo LAMP para T. vaginalis, desarrollado, era un método simple, rápido, sensible y específico para la detección de la trichomoniasis, la infección de transmisión sexual, curable, más común. Esta NAAT eficiente y rentable, tiene un gran potencial como aplicación para el diagnóstico y la vigilancia a gran escala, la detección primaria y el control de la trichomoniasis, en los puntos de atención y en entornos con recursos limitados. El estudio fue publicado en la edición de julio de 2014 de la revista Diagnostic Microbiology and Infectious Disease.


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