Prueba molecular altamente sensible para la tuberculosis

La detección rápida y exacta de Mycobacterium tuberculosis es crucial para el diagnóstico de la tuberculosis (TB), pero los métodos convencionales de diagnóstico tienen sensibilidad o especificidad limitada y requieren mucho tiempo.

Una prueba nueva, altamente sensible, de amplificación de ácidos nucleicos (NAA), combinó la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) anidada y de tiempo real, y se desarrolló una PCR en tiempo real, anidada en un tubo, para la detección de M. tuberculosis, que tiene las ventajas de las dos técnicas de PCR, incluyendo la PCR en tiempo real.

Científicos biomédicos de laboratorio de la Universidad de Yonsei (Wonju, República de Corea) y sus colegas recogieron muestras de esputo de 167 individuos con TB activa y de 108 sujetos sanos. Las muestras de esputo fueron licuadas y procesadas y los sedimentos fueron suspendidos en solución salina estéril y utilizados para la preparación de frotis, la inoculación en medios de Löwenstein-Jensen (LJ) y la extracción de ADN. La presencia de bacilos ácido-alcohol resistentes (BAAR) fue examinada utilizando un microscopio de luz y los resultados de baciloscopia fueron calificados.

La identificación inicial de M. tuberculosis fue confirmada mediante la prueba inmunocromatográfica SD TB Ag MPT64 (SD Bioline Inc .; Yongin, Corea) y el kit de diagnóstico molecular REBA Myco-ID (M&D Inc .; Wonju, Corea). Los científicos diseñaron una PCR en tiempo real, anidada, de un solo tubo, para tener dos reacciones secuenciales con dos conjuntos de cebadores y sondas duales para la secuencia de IS6110 de M. tuberculosis, en un tubo cerrado único. Los ensayos de PCR en tiempo real fueron realizados y validados utilizando el Sistema de PCR en tiempo real de Applied Biosystems, 7500 Fast (Foster City, CA, EUA).

Los límites mínimos de detección de la PCR en tiempo real para IS6110 fueron 100 fg/L y para la PCR, en tiempo real, anidada, de un tubo, IS6110, fue de 1 fg/L de ADN de M. tuberculosis. La PCR en tiempo real, AdvanSure TB/NTM-PCR (LG Life Science; Seúl, Corea), la PCR en tiempo real IS6110, y la PCR en tiempo real, anidada, en un solo tubo, mostraron un 100% de sensibilidad y 100% de especificidad para los aislados clínicos de M . tuberculosis y para los aislados de micobacterias no tuberculosas (NTM). En comparación, la sensibilidad de la PCR en tiempo real AdvanSure TB/NTM fue de 91% (152/167) y de 94,6% (158/167) para la PCR en tiempo real, única, IS6110 y del 100% (167/167) para la PCR en tiempo real, anidad, de un solo tubo.

Los autores concluyeron que el nuevo ensayo eficaz, altamente sensible de PCR, la PCR anidada en un tubo focalizada en la secuencia IS6110 que fue desarrollada para la detección de M. tuberculosis, utiliza las ventajas de la PCR anidada y de la PCR en tiempo real. La PCR en tiempo real, anidada, en un solo tubo, mostró una sensibilidad superior con respecto a la PCR convencional en tiempo real y la PCR, en tiempo real, AdvanSure TB/NTM, un kit de PCR en tiempo real, comercial, para la TB. El estudio fue publicado el 30 de agosto de 2014, en la revista Diagnostic Microbiology and Infectious Disease.

Enlaces relacionados:

Yonsei University

SD Bioline Inc.

M&D Inc.

Applied Biosystems

LG Life Science