Análisis ultrasensible detecta malaria asintomática de baja densidad

La sangre recolectada mediante punción digital fue utilizada para realizar la PDR Malaria Ag P.f/Pv (Standard Diagnostics; Yongin, República de Corea) inmediatamente y se colocó 0,3 ml de sangre en los tubos de recolección. Se extrajo el ácido nucleico total a partir de 200 μL de mezcla de sangre/estabilizador, usando el kit QIAamp 96 DNA para Sangre (Qiagen; Valencia, CA, EUA), pero con un volumen de elución de 50 μL de solución tampón.

Se desarrolló una reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa (RT-PCR) para la detección multiplexada del gen 18S de ARN ribosomal y del ARN ribosomal del Plasmodium falciparum y Plasmodium vivax, respectivamente. Se utilizaron muestras simuladas de campo almacenados durante 14 días con solución tampón para la conservación de la muestra con el fin de evaluar la sensibilidad y especificidad, analíticas. Además, se analizaron 1.750 muestras de campo del sureste de Myanmar tanto mediante una PDR como con la RT-PCR ultrasensible, que fue realizada en una máquina de PCR en tiempo real, en un instrumento Roche Lightcycler 96 o 480 de tiempo real (Roche Diagnostics, Indianápolis, IN, EUA).

Se determinaron los límites de detección (LOD) en condiciones simuladas de campo y se encontró que este valor era de menos de 16 parásitos/mL para P. falciparum y de 19,7 copias/ μL para P. vivax (utilizando un sustituto plásmido), aproximadamente 10.000 veces menor que para la PDR. De las 1.739 muestras evaluadas exitosamente tanto por la RT-PCR ultrasensible como por la PDR, sólo dos dieron resultados positivos por la PDR, mientras que 24 dieron resultados positivos para P. falciparum, 108 dieron resultados positivos para P. vivax, y 127 dieron resultados positivos, para P. vivax y/o P. falciparum usando la RT-PCR ultrasensible.

Los autores concluyeron que el método de RT-PCR ultrasensible es un método robusto, ensayado en el campo, de detección primaria, que es mucho más sensible que las PDR. Una optimización adicional puede dar como resultado una herramienta verdaderamente escalable, adecuada para la vigilancia generalizada de la parasitemia, de bajo nivel, asintomática por P. falciparum y P. vivax. El estudio fue publicado el 23 de diciembre de 2015, en la revista Malaria Journal.

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University of Maryland School of Medicine
Standard Diagnostics
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