Identifican bacterias aeróbicas con espectrometría de masas MALDI-TOF

La espectrometría de masas asistida de matriz láser de desorción ionización tiempo de vuelo (MALDI-TOF MS) es una herramienta de diagnóstico para la identificación de organismos que se encuentran rutinariamente en el laboratorio de microbiología.

La MS MALDI-TOF ha demostrado ser un método de diagnóstico rápido y rentable para el uso rutinario en el laboratorio de microbiología clínica y la tecnología MALDI-TOF MS utiliza láser de ionización para los elementos estructurales de la cepa aislada con el fin de generar espectros aislados, derivados, que se comparan con una base de datos de referencia.

Los científicos en el Hospital de Niños de Los Ángeles (California, EUA) y sus colegas en la Facultad de Medicina Keck (Los Ángeles, CA, EUA) utilizaron aislamientos recuperados e identificados, previamente, por cultivos de rutina de muestras clínicas las cuales fueron cultivadas en los medios apropiados, identificados directamente por MALDI-TOF MS y se compararon los resultados con los de varios métodos de identificación bioquímica. Un total de 996 de aislamientos organismos Gram-positivos y Gram-negativos, aeróbicos fueron incluidos en el estudio.

Todas las pruebas de MALDI-TOF MS fueron realizadas por duplicado con el mismo hisopo sembrando en dos puntos en la placa de destino, un punto representando un inóculo “pesado” y el segundo punto representando un inóculo “liviano”. La adquisición y el análisis de los espectros de masas fueron realizado usando el espectrómetro de masas Microflex LT (Bruker Daltonics, Fremont, CA, EUA). Para los estudios de los medios, 84 bacterias Gram-negativas fueron cultivadas en agar sangre, agar chocolate y agar MacConkey; 74 bacterias Gram-positivas fueron cultivadas en agar sangre, agar chocolate, y agar ácido nalidíxico colistina (CNA). Para los estudios de temperatura y estabilidad, cuatro bacterias Gram-negativas y cuatro bacterias Gram-positivas, fueron cultivadas en agar sangre. Los resultados de MALDI-TOF MS fueron comparados con los obtenidos mediante métodos rutinarios realizados en el laboratorio de microbiología. Todas las identificaciones discordantes fueron confirmadas mediante análisis bioquímicos adicionales o por secuenciación de 16S rARN.

En la interpretación de datos de MALDI-TOF MS, una puntuación igual o superior a 2,0 es inequívoca para una identificación confiable a nivel de especie, una puntuación de 1,7 a 1,99 se considera fiable a nivel de género y una puntuación de menos de 1,7 se considera poco fiable para la identificación de bacterias. Utilizando el método de frotis directo, 99,5% y 98,0% de las bacterias aeróbicas Gram-negativas y Gram-positivas, respectivamente, fueron identificadas a nivel de género. En una puntuación igual o superior a 1,9, 97,6% los organismos Gram-negativos y 94,6% los organismos Gram-positivos fueron correctamente identificados a nivel de especie por el método de frotis directo. Sólo el 1.1% de los aislamientos requirió una extracción directa a la placa. El método de frotis directo demostró ser robusto, a diversas temperaturas de crecimiento, medios de cultivo, edad del cultivo y los diferentes operadores no tuvieron un impacto notable en la tasa de identificación bacteriana.

Los autores concluyeron que el método de frotis directo era exacto y eficaz para agilizar el flujo de trabajo de la identificación de bacterias Gram-positivas y Gram-negativas en su laboratorio clínico. Para simplificar, recomiendan usar el método de frotis directo para la mayoría de los especímenes que se encuentran comúnmente en el laboratorio clínico y una puntuación de corte espectral optimizada igual o mayor a 1.9 para las tasas de identificación a nivel de especies mejoradas. El estudio fue publicado el 14 de diciembre de 2015, en la revista Journal of Clinical Laboratory Analysis.

Enlaces relacionados:

Children's Hospital Los Angeles
Keck School of Medicine
Bruker Daltonics