Correlacionan prueba de nanopartícula en orina para Chagas con niveles de parasitemia

El diagnóstico precoz de la enfermedad de Chagas reactivada en los pacientes infectados por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) les podría salvar la vida. En América Latina, el diagnóstico se realiza mediante la detección microscópica del parásito Trypanosoma cruzi en la sangre, una prueba de diagnóstico que carece de sensibilidad.

 

Se propone una nanotecnología novedosa basada en el uso de partículas de nano-porosas que contienen cebos químicos de alta afinidad (tripán azul) en el centro interno, para la concentración y preservación de los antígenos en la orina. Esta tecnología, conocida como prueba de nanopartícula para Chagas en orina o Chunap, ha sido aplicada para el diagnóstico directo de la enfermedad congénita de Chagas con excelente concordancia con las pruebas de diagnóstico estándar.

 

Un equipo internacional de científicos dirigido por aquellos en la Universidad Peruana Cayetano Heredia (Lima, Perú), evaluaron muestras de 31 individuos infectados concomitantemente por el T. cruzi y el VIH y 24 personas no infectadas por el T. cruzi, de Cochabamba y Santa Cruz, en Bolivia. La confirmación de la infección por T. cruzi se basó en los resultados positivos por dos o más de las siguientes pruebas comerciales: Chagatest ELISA y Chagatest ELISA recombinante v 3,0 (Wiener Lab; Rosario, Argentina) y la prueba de hemaglutinación indirecta PolyChaco (IHA) (Laboratorio Lemos; Buenos Aires, Argentina). A los pacientes se les pidió que recolectaran y entregaran la primera orina de la mañana antes de la ingestión de líquidos, y las muestras fueron recolectadas por la técnica del chorro medio. El análisis de orina corriente se realizó mediante tiras reactivas de orina.

 

La concentración de antígenos de T. cruzi fue realizada utilizando partículas nano-porosas de hidrogel. Se realizaron el análisis de electroforesis y de Western Blot de los antígenos. Los niveles de antígeno se determinaron mediante la densitometría de los Western Blots. La presencia de cualquiera de las cinco bandas de diagnóstico (22 kDa, 42 kDa, 58 kDa, 75 kDa y 82 kDa) fue considerada como un resultado positivo. En cada experimento se incluyeron un control negativo, una muestra de orina de voluntarios sanos, y un control positivo, 10 mL de una muestra de orina de un voluntario sano que contenía 1 ng de antígeno secretado-excretado de T. cruzi.

 

Los niveles de parasitemia en pacientes con serología positiva para enfermedad de Chagas fueron clasificadas de la siguiente manera: Parasitemia alta o reactivación de la enfermedad de Chagas (parasitemia detectable por microscopía), parasitemia moderada (no detectable por microscopía pero detectable mediante reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR) y parasitemia negativa (indetectable por microscopía y qPCR). El porcentaje de resultados positivos detectados por Chunap fue: 7/7 (100%) en los casos de reactivación, 11/12 (91,7%) en los casos de parasitemia moderada, y 5/12 (41,7%) en los casos de parasitemia negativa. Se encontró que la especificidad de Chunap fue de 91,7%. Se eligió un punto de corte superior a 105 pg para determinar a los pacientes con reactivación de la enfermedad de Chagas (7/7). Los niveles de antigenuria eran 36 veces más altos en los pacientes con recuentos de linfocitos CD4 + por debajo de 200/ml. El estudio fue publicado el 26 de febrero de 2016, en la revista Public Library of Science Neglected Tropical Diseases.

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