Manchas secas permiten detectar anticuerpos anti-IgM de encefalitis japonesa

El uso del papel de filtro como una herramienta simple, de bajo costo para el almacenamiento y el transporte de la sangre, como manchas de sangre seca o tarjetas de Guthrie, para ensayos de diagnóstico está bien establecido, pero por el contrario, hay una escasez de evaluaciones para el uso de manchas secas de líquido cefalorraquídeo, para las evaluaciones diagnósticas.

 

La infección por el virus de la encefalitis japonesa (JEV) está muy extendida en Asia y afecta principalmente a los niños en zonas pobres y rurales; el virus se propaga al cerebro y la médula espinal con resultado de muerte y discapacidad significativa. El diagnóstico requiere el análisis de la respuesta inmune anticuerpos específicos para el JEV en el líquido cefalorraquídeo (LCR) que rodea el cerebro y la médula espinal.

 

Un equipo internacional de científicos dirigidos por los de la Facultad de Higiene y Medicina Tropical de Londres (Reino Unido) desarrolló un protocolo de manchas de LCR secas para evaluar su desempeño diagnóstico mediante el uso del análisis de captura de anticuerpos por ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas, para inmunoglobulina M (IgM) de JEV (JEV MAC-ELISA) recomendado por la Organización Mundial de la Salud (Ginebra, Suiza). Las muestras de LCR y de suero de los pacientes fueron recolectadas en tres hospitales de Laos, entre 2009  y hasta 2015.

 

Los investigadores emplearon una técnica novedosa usando un círculo de pre-cortado de papel de celulosa-algodón. Las muestras se dejaron secar en el papel de filtro pre-cortado y luego se dejaron por 30 días a temperatura ambiente. Se eligieron dos tipos de papel de filtro, que fueron utilizados en todos los estudios: la tarjeta Salvadora de Proteínas, Whatman 903 (903) y el papel secante 3MM Chr Blotting (3 MM) (GE Healthcare Life Sciences; Reino Unido). El análisis comercial JEV MAC-ELISA utilizado, fue el JE Detect IgM Capture ELISA (Inbios; Seattle, WA, EUA).  Este ensayo mide la densidad óptica (DO) de cada muestra con Antígeno Recombinante JEV, JERA, comparado con el Antígeno de Control Normal (NCA) con el fin de ajustar la reactividad de fondo no específica.

 

Hubo un total de 132 muestras que contenían el volumen de líquido suficiente para el análisis. Cuando se analizaron para la presencia de anticuerpos virales 34 muestras secas y 38 muestras puras dieron resultados positivos, con una concordancia general de 92,4%. En comparación con las muestras puras, no secadas, las manchas secas mostraron un 81,6% de concordancia positiva y 96,8% de concordancia negativa. La saturación de papel de filtro tiene un uso potencial en el contexto más amplio de la detección de patógenos, incluyendo las manchas secas para la detección de otros analitos en el LCR y otros fluidos corporales. Los autores llegaron a la conclusión de que el nuevo diseño del papel de filtro pre-cortado, saturado con LCR, podría proporcionar una herramienta útil para el diagnóstico de JEV en lugares con acceso limitado a los laboratorios. Tiene el potencial para mejorar la vigilancia nacional del JEV e informar a de políticas de vacunación.

 

Tehmina Bharucha, PhD, autora principal del estudio, dijo: “Este nuevo método para saturar manchas secas de líquido cefalorraquídeo tiene el potencial de mejorar nuestro conocimiento de la epidemiología del virus de la encefalitis japonesa, e informar a las políticas de salud, donde más se necesitan. También podría ser transferido para ser usado en el diagnóstico de otras enfermedades infecciosas, incluyendo el uso de otras muestras de fluidos corporales”. El estudio fue publicado el 17 de marzo de 2016, en la revista Public Library of Science Neglected Tropical Diseases.

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