Prueba rápida de diagnóstico molecular detecta virus Zika

El virus Zika sólo ha obtenido recientemente la atención debido a los grandes brotes en todo el mundo y una prueba de amplificación de ácidos nucleicos (NAAT) fácil de usar podría desempeñar un papel importante en la detección temprana de la infección y el tratamiento de los pacientes.

 

El diagnóstico de virus Zika se ha basado, hasta ahora, en métodos serológicos, los cuales son a menudo largos de procesar o en las pruebas de amplificación de ácidos nucleicos (NAAT), tales como la reacción en cadena de la polimerasa de transcripción inversa, en tiempo real (RT-PCR). La RT-PCR requiere el uso de instrumentos de alta precisión para las reacciones de ciclado térmico y personal cualificado para realizar el protocolo complejo y la interpretación de los datos.

 

Los científicos de Orion Diagnostica OY (Espoo, Finlandia) y un colega británico, han desarrollado una NAAT alternativa, el ensayo de amplificación basado en la transcripción inversa de invasión de hebras (RT-SIBA) para la detección rápida del virus Zika. Durante las reacciones RT-SIBA, el ácido ribonucleico (ARN), del virus Zika, primero se transcribe inversamente a ADN complementario (cADN), seguido de amplificación y detección del cADN en condiciones de reacción isotérmica. La prueba SIBA se basa en un oligonucleótido de invasión (OI) de cadena sencilla, recubierto por una recombinasa, para la separación de un dúplex diana complementario. También compararon el desempeño de la RT-SIBA con la PCR en tiempo real, para la detección del virus Zika. La reacción RT-SIBA se realizó utilizando el dispositivo de PCR en tiempo real, Agilent Mx3005P (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, EUA)  y reacciones paralelas, utilizando un dispositivo de detección de fluorescencia portátil, Orion GenRead, que es adecuado para las aplicaciones en los puntos de atención o en el campo.

 

El equipo encontró que en la RT-SIBA, el tiempo hasta los resultados positivos para 1.000 copias de la plantilla de ARN transcrito in vitro se obtuvo después de un promedio de 17 minutos. A la inversa, los resultados positivos, para 1.000 copias de la plantilla de transcripción de ARN in vitro, por RT-PCR, se obtuvieron después de un promedio de 68 minutos. La RT-SIBA permite la transcripción inversa simultánea del ARN del virus Zika y la amplificación del cADN, a la misma temperatura de reacción. Esto permite la detección rápida del ARN del virus Zika en un tiempo máximo de 30 minutos y fue significativamente más rápido que el método de RT-PCR. El virus de la fiebre amarilla, del dengue 1, del Nilo Occidental, el virus Chikungunya o cualquiera de los 15 microorganismos diferentes, no relacionados, no fueron detectados por la RT-SIBA y los ensayos de RT-PCR Zika. Esto puede indicar que tanto los ensayos RT-SIBA como RT-PCR, son específicos, para la detección del ARN del virus Zika.

 

Los autores concluyeron que la rápida detección y la alta sensibilidad analítica mostrada por la prueba RT-SIBA para la detección de virus Zika, así como la tolerancia a la inhibición derivada de la muestra, demuestran que el método puede ser una herramienta de diagnóstico molecular de gran alcance para la detección del virus Zika. Dado que el método se puede ejecutar en dispositivos portátiles y de relativamente bajo costo, puede ser aplicada en la rápida respuesta a los brotes. El estudio fue publicado el 1 de septiembre de 2016, en la revista Diagnostic Microbiology and Infectious Disease.

Enlace relacionado: