Validan análisis LAMP para SARM en muestras invasivas

El Staphylococcus aureus es una de las principales causas de infecciones óseas y articulares y uno de los patógenos causales más comunes de la neumonía bacteriana en los niños. Se ha atribuido un mayor riesgo de mortalidad por infecciones estafilocócicas invasivas al S. aureus resistente a la meticilina (SARM).

 

La detección de patógenos mediante amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP), que es un método rápido, rentable y simple con alta sensibilidad, ha resuelto las limitaciones principales de los métodos basados en el cultivo que requieren mucho tiempo y las costosas técnicas moleculares de reacción en cadena de la polimerasa (PCR).

 

Los microbiólogos moleculares del Hospital Universitario de Sant Joan de Déu (Barcelona, España) evaluaron los resultados analíticos y el desempeño diagnóstico del sistema eazyplex MRSA, para la detección de S. aureus y SARM en muestras invasivas como los líquidos pleural y sinovial, en comparación con el cultivo bacteriano, establecido como estándar de oro. Se diluyó un volumen de muestra pleural, al que se le agregó la bacteria (validación analítica) o de líquido pleural/sinovial (validación diagnóstica) en agua estéril y se extrajo el ADN genómico utilizando el sistema NucliSENS EasyMag (bioMérieux Inc., Durham, NC, EUA www.biomerieux-usa.com).

 

El equipo pipeteó 25 µL de una mezcla de ADN en los seis pozos de la tira eazyplex MRSA (Amplex Diagnostics, Gars-Bahnhof, Alemania). Estas contienen una mezcla de reactivos y seis cebadores en cada tapa para la amplificación simultánea pero individual de los genes específicos de Staphylococcus epidermidis y S. aureus, así como de los genes de resistencia mecA y mecC para la detección del SARM. Los productos de amplificación se generaron mediante la síntesis de ADN por autociclaje isotérmico y se visualizaron mediante medición de fluorescencia en tiempo real, con el dispositivo Genie II (OptiGene Ltd, Horsham, Reino Unido). 

 

El nuevo sistema detectó apropiadamente un panel de control de calidad de muestras clínicas con ADN de S. aureus sensible a la meticilina (SASM), SARM y otros patógenos. El límite de detección (LoD) se estableció en 6.4 × 103 UFC/mL para S. aureus y 1.0 × 104 UFC/mL para el SARM. La validación diagnóstica del ensayo eazyplex MRSA se realizó en 51 muestras clínicas invasivas prospectivas, dando como resultado una sensibilidad y especificidad de 83,3% y 97,8%, respectivamente, para la detección de S. aureus. El tiempo medio de respuesta fue de 70 minutos.

 

Los autores concluyeron que el sistema de análisis, eazyplex MRSA, tiene un potencial prometedor como una herramienta de diagnóstico para la detección temprana de S. aureus en muestras recogidas de los sitios del cuerpo normalmente estériles. El estudio fue publicado en la edición de junio de 2017 de la revista International Journal of Infectious Diseases.