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Una prueba LAMP detecta rápidamente la Clamidia de transmisión sexual

Por el equipo editorial de Labmedica en español
Actualizado el 16 Jan 2019
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Imagen: Un kit de preparación de plantillas de PCR de Alta Pureza (Fotografía cortesía de Roche Diagnostics).
Imagen: Un kit de preparación de plantillas de PCR de Alta Pureza (Fotografía cortesía de Roche Diagnostics).
La Chlamydia trachomatis es la principal causa de enfermedades de transmisión sexual (ETS) en mujeres y hombres tanto en los países desarrollados como en los países en desarrollo, con más de 110 millones de casos al año. C. trachomatis resiste el tratamiento con antibióticos y es un cofactor en la transmisión del VIH y el cáncer de cuello uterino humano.

Para las pruebas de amplificación de ácidos nucleicos, la amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP, por sus siglas en inglés) ha presentado una alternativa atractiva a los métodos estándar como la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) debido a su bajo precio, facilidad de uso, resultados rápidos y que no requiere termocicladores y kits especializados para la extracción y purificación del ADN.

Los científicos de la Universidad de Chulalongkorn (Bangkok, Tailandia) y sus asociados, han desarrollado un sistema de detección de puntos de atención (POC) rápido, barato, fácil de interpretar, sensible y específico (POC) para C. trachomatis, usando un ensayo LAMP para la amplificación del ADN de C. trachomatis, seguido de una sonda de nanopartículas de oro (AuNP) para la lectura específica colorimétrica de C. trachomatis.

El equipo recolectó muestras de hisopos endocervicales, que se seleccionaron al azar de una cohorte de estudio prospectivo de la prevalencia de enfermedades de transmisión sexual (ETS) en mujeres sintomáticas y sanas (que pueden incluir pacientes no sintomáticos) tailandesas, con edades entre 15 y 54 años en Bangkok y áreas cercanas. Las muestras fueron recolectadas por los clínicos durante 2011 y 2012 de voluntarias calificadas. El tamaño de la muestra de 130 (96 sintomáticas y 34 sanas) se computó en base a una fórmula estadística estándar.

Se diseñó un conjunto de seis cebadores para que LAMP se dirigiera a ocho regiones distintas en el gen ompA de C. trachomatis. Con el fin de determinar las condiciones óptimas para el ensayo LAMP (temperatura de incubación y tiempo de incubación), la reacción LAMP se incubó a una temperatura de 59°C a 65°C durante 30 a 60 minutos (sin cebadores de bucle) y durante 10 a 35 minutos (con cebadores de bucle). Una reacción LAMP de 25 μL comprendía una plantilla de ADN, un kit de preparación de plantillas de PCR de alta pureza (Roche Diagnostics, Risch-Rotkreuz, Suiza). Se agregaron nanopartículas de oro de 10 nm a la sonda para crear la sonda complementaria de AuNP-ADN específica para el producto LAMP de C. trachomatis.

De las 130 muestras clínicas, la sensibilidad de la prueba LAMP-AuNP fue del 96% (23/24) y la especificidad del 99% (105/106). Este resultado es más alto que el de la prueba LAMP-GE. Los porcentajes de exactitud del ensayo para la PCR-GE y la LAMP-AuNP fueron iguales (98%), mientras que para la LAMP-GE fue del 96%. Las AuNPs permiten una visualización simple de los resultados y mejoran la especificidad y sensibilidad de la prueba LAMP. Los porcentajes de exactitud del ensayo para la detección de replicación independiente fueron 100% para la PCR-GE, 99% para la LAMP-AuNP y 98% para la LAMP-GE. La verificación de los espectros UV-vis apoyó la lectura colorimétrica conveniente del ensayo LAMP-AuNP.

Los autores concluyeron que la detección con la prueba LAMP-AuNP de C. trachomatis es apropiada para entornos locales y con recursos limitados. El ensayo utiliza directamente muestras clínicas, obtiene resultados en 32 a 47 minutos y el resultado es legible a simple vista. El estudio fue publicado el 20 de diciembre de 2018 en la revista Public Library of Science Neglected Tropical Diseases.

Enlace relacionado:
Universidad de Chulalongkorn
Roche Diagnostics



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