Cuantificación de subpoblaciones de leucocitos con micromatrices de metilación de ADN

Una novedosa técnica basada en micromatrices usa la metilación del ADN para cuantificar simultáneamente las subpoblaciones de leucocitos, permitiendo la investigación de las modulaciones inmunes, tanto en las muestras de sangre frescas como en las muestras archivadas que previamente no se podían utilizar para este tipo de análisis.

Los patrones de metilación de ADN específicos del linaje celular permiten hacer la diferenciación entre las subpoblaciones normales de leucocitos humanos y se pueden usar para detectar y cuantificar estas subpoblaciones en la sangre periférica. Sin embargo, todos los métodos actuales para el recuento de células inmunes, en una muestra de sangre, requieren células enteras, siendo los métodos “estándar de oro”: los recuentos manuales diferenciales de cinco partes, el hemograma (recuento sanguíneo completo) con un recuento automático diferencial de cinco partes y la clasificación de células activada por fluorescencia (FACS).

Los investigadores de la Universidad de Brown (Providence, Rhode Island, EUA) han desarrollado un método que utiliza la metilación del ADN para cuantificar simultáneamente varias subpoblaciones de leucocitos sin la necesidad de contar células enteras.

Los investigadores utilizaron los análisis mediante micromatriz Illumina (San Diego, CA, EUA) Infinium HumanMethylation y VeraCode GoldenGate de Metilación para identificar firmas de metilación del ADN específicas del linaje celular que diferencian las células T humanas, las células B, las células NK, los monocitos, los eosinófilos, los basófilos y los neutrófilos. A continuación, emplearon un método basado en la bioinformática para cuantificar estos tipos de células en mezclas complejas, incluyendo sangre total, utilizando firmas de metilación del ADN en apenas 20 CpG (citosina y guanina conectados por un enlace fosfodiéster) loci.

Aplicando este método, basado en la metilación del ADN, con el fin de cuantificar los componentes celulares en 80 muestras de sangre entera humana, verificaron la exactitud por comparación directa con métodos de cuantificación inmunes, que son el estándar de oro y que utilizan las características físicas, ópticas, y proteómicas de las células. También demostraron que el método no se vio afectado por el almacenamiento de las muestras de sangre, incluso bajo condiciones que impedían el uso de los métodos estándar de oro.

“Cada tipo de célula tiene su propia firma de metilación”, dijo el autor principal, el Dr. Karl T. Kelsey, profesor de epidemiología en la Universidad de Brown. “Una vez que se comprende la firma única y realmente inmutable que dirige la diferenciación de la célula, entonces usted puede utilizar eso y ya no se vuelve a necesitar la célula”.

El estudio fue publicado en la edición digital del 5 de marzo de 2014, de la revista Genome Biology.

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