Se utiliza la espectrometría de masas MALDI-TOF para identificar la pitiosis

La pitiosis es una enfermedad infecciosa, potencialmente mortal, causada por el oomiceto Pythium insidiosum. La enfermedad se ha informado cada vez más en todo el mundo y a la mayoría de los pacientes con pitiosis es necesario realizar la extirpación quirúrgica de un órgano infectado.

En la última década, emergió la espectrometría de masas ionización-tiempo de vuelo de desorción láser asistida por matriz (MALDI-TOF MS), como una herramienta de diagnóstico, novedosa y poderosa, para facilitar la identificación clínica de muchos microorganismos patógenos, incluyendo las bacterias y los hongos.

Científicos de la Universidad Mahidol (Bangkok, Tailandia) aislaron un total de 13 cepas de P. insidiosum, de ocho humanos y de cinco animales con pitiosis, de diferentes ubicaciones geográficas y estas cepas se dividieron en dos grupos. Todos los organismos se mantuvieron en medios de agar dextrosa Sabouraud a 25°C. Varias porciones pequeñas de una colonia de cada organismo fueron transferidas a un matraz de 50 ml que contenía 10 mL de caldo dextrosa Sabouraud, y se incubaron a 37°C durante una semana, antes de recoger el material fúngico para realizar la extracción de proteínas.

La proteína se extrajo de los organismos y el sobrenadante que contenía la proteína extraída se colocó sobre una placa clara de acero pulido (Bruker Daltonics, Leipzig, Alemania) en 40 duplicados (con el fin de generar una base de datos MALDI-TOF MS para el P. insidiosum) o cinco repeticiones (para evaluar el desempeño de la MS MALDI-TOF para la identificación de P. insidiosum), secada al aire a temperatura ambiente, y luego superpuesta con 0,5 μL de la solución matriz. Se extrajeron moldes de ADN genómico (ADNg) de los organismos y se sometieron a una reacción en cadena de la polimerasa múltiple (PCR) basada en el polimorfismo de nucleótido único.

Los científicos informaron que la MALDI-TOF MS identificó con exactitud las 13 cepas de P. insidiosum analizadas, hasta el nivel de especie. Los espectros de masas de P. insidiosum no coincidieron con otros microorganismos, incluidos los hongos (es decir, especies de Aspergillus, especies de Fusarium y especies fúngicas de la clase Zigomicetos), que tienen morfologías microscópicas similares con este oomiceto. Los métodos de biotipificación basados en la secuencia MALDI-TOF MS y rADN clasificaron consistentemente a P. insidiosum en tres grupos: Clado-I (cepas americanas), II (cepas asiáticas y australianas) y III (principalmente cepas tailandesas).

Los autores concluyeron que la técnica de MALDI-TOF MS fue utilizada con éxito para la identificación y biotipificación de P. insidiosum. La base de datos de los espectros de masas obtenidos permite a los laboratorios de microbiología clínica, bien equipados con un espectrómetro de masas MALDI-TOF, identificar convenientemente a P. insidiosum, sin tener que requerir ningún reactivo específico de patógeno (es decir, antígeno, anticuerpo o cebadores). El estudio fue publicado el 6 de septiembre de 2018 en la revista International Journal of Infectious Diseases.

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Universidad Mahidol
Bruker Daltonics