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05 sep 2020 - 09 sep 2020
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Desarrollan una prueba rápida nueva para detectar la carbapenemasa

Por el equipo editorial de LabMedica en español
Actualizado el 01 Apr 2020
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Imagen: El lector de microplacas, SpectraMax M5, es el estándar para el lector de absorbancia multimodal UV/visible, proporcionando detección ultrarrápida de rango espectral completo para las celdas, microplacas de 96 y 384 pozos (Fotografía cortesía de Molecular Devices).
Imagen: El lector de microplacas, SpectraMax M5, es el estándar para el lector de absorbancia multimodal UV/visible, proporcionando detección ultrarrápida de rango espectral completo para las celdas, microplacas de 96 y 384 pozos (Fotografía cortesía de Molecular Devices).
Como una β-lactamasa potente, la carbapenemasa puede degradar casi todos los medicamentos antimicrobianos β-lactámicos, incluidos los carbapenems, considerados como la última línea de terapia para muchas infecciones potencialmente mortales. Si no se controla, se espera que la propagación de estas carbapenemasas aumente el fracaso terapéutico y deje a muchos pacientes sin opciones de tratamiento efectivas.

A pesar de la urgencia, la detección oportuna de carbapenemasas se mantiene como un desafío para los laboratorios de microbiología. Los ensayos fenotípicos son económicos y fáciles de realizar, pero su uso requiere de 24 a 48 horas y muchos carecen de sensibilidad o especificidad. El uso generalizado de otros ensayos (por ejemplo, pruebas moleculares de genes de carbapenemasas, detección por espectrometría de masas de hidrólisis del carbapenem) se ve obstaculizado por la experiencia requerida para realizarlos y su costo.

Los científicos afiliados al Hospital General de Massachusetts (Boston, MA, EUA) demostraron que se puede detectar de manera sensible y específica en 10 minutos la producción de carbapenemasas en bacterias usando la identificación mediante fluorescencia de la actividad de la β-lactamasa (FIBA), con un solo paso. La prueba FIBA utiliza una sonda de fluorescencia oscura, β-LEAF (fluoróforo activado por la enzima β-lactamasa), que se vuelve fluorescente cuando es escindida por las β-lactamasas, incluidas las penicilinasas, las β-lactamasas de espectro extendido (BLEE), la ampC β-lactamasas y las carbapenemasas.

El equipo ensayó la prueba FIBA en 76 aislados de infección seleccionados al azar. Para comenzar el ensayo, se añaden a cada pocillo 25 μL de suspensión bacteriana que contiene 1 x 1010 UFC/mL hecha con colonias cultivadas durante la noche en agar BHI. Para controlar la tasa de aumento, la medición de fluorescencia se realiza a 37°C a intervalos de 10 segundos durante 10 minutos con Ex/Em 450/510 nm en el lector de placas, Spectramax M5 (Molecular Devices, San José, CA, EUA).

Los resultados de las pruebas genéticas para la resistencia a la lactama β se proporcionaron con los aislamientos. Entre estos, 55 eran carbapenemasa positivas, portando los principales tipos epidémicos de carbapenemasas, incluyendo Klebsiella pneumoniae carbapenemasa, imipenem-hidrolizante de β-lactamasa, metalo-β-lactamasa, Nueva Delhi metalo-β-lactamasa, oxacilinasa, enzima de Serratia marcescens, São Paulo metalo- β-lactamasa, metalo-β-lactamasa codificada por integrón Verona y metalo-β-lactamasa oxacilinasa de Nueva Delhi. Los otros 21 aislamientos expresaron β-lactamasas no carbapenemasas.

Los autores concluyeron que la prueba FIBA se puede realizar ≈10 veces más rápido que la prueba de carbapenemasas más rápida disponible en el mercado, manteniendo una sensibilidad y especificidad comparables. Su análisis automatizado mejora el tiempo de respuesta y reduce la variabilidad del operador. Con un costo/ensayo de reactivo de aproximadamente un dólar, la prueba FIBA tiene un precio cercano a las pruebas fenotípicas, pero es mucho más rápida y requiere menos mano de obra. El estudio fue publicado en la edición de abril de 2020 de la revista Emerging Infectious Diseases.

Enlace relacionado:
Hospital General de Massachusetts
Molecular Devices


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