Detectan la encefalitis toxoplásmica en la orina de pacientes con VIH

La encefalitis por toxoplasma (ET) es la infección neurológica oportunista notificada con mayor frecuencia en pacientes infectados por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) desde la introducción del TAR combinado (TARc). El diagnóstico de ET es un desafío en las mejores circunstancias clínicas.

La escasa sensibilidad clínica de la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR) para Toxoplasma gondii en sangre y líquido cefalorraquídeo (LCR) y la disponibilidad limitada de tecnología de diagnóstico molecular y de imagenología, deja a los médicos en entornos de recursos limitados con pocas opciones además del tratamiento empírico.

Un equipo internacional de científicos dirigido por la Universidad de Illinois Chicago (Chicago, IL, EUA) reclutó en un estudio a 164 pacientes positivos para VIH de Perú y Bolivia y 51 pacientes positivos ambulatorios VIH/T gondii como controles. Se tomaron muestras de sangre y orina en el momento de la inscripción que, para la mayoría de los pacientes hospitalizados fue poco después de la admisión; se recogió LCR remanente si al paciente se le hacía una punción lumbar como parte de su atención médica. Los recuentos de células CD4 y CD8 y las cargas virales se extrajeron de las historias clínicas de los participantes.

Los investigadores describieron una prueba de concepto para nuevos diagnósticos de orina para la ET utilizando nanopartículas de poli-N-isopropilacrilamida teñidas con Azul Reactivo-221 para concentrar antígenos, aumentando sustancialmente el límite de detección. Después de la concentración de nanopartículas, se utilizó una técnica estándar de transferencia Western con un anticuerpo monoclonal para la detección de antígenos. El estado serológico de Toxoplasma gondii IgG se determinó con un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) interno. Para la qPCR, las secuencias diana se amplificaron usando un Light Cycler (Applied Biosciences, Foster City, CA, EUA). Las muestras digeridas se analizaron mediante monitorización de reacción en paralelo (PRM) en un espectrómetro de masas Orbitrap Fusion con una HPLC Nanospray EASY-nLC 1200 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, EUA).

El equipo informó que el límite de detección (LoD) de los antígenos GRA1 y SAG1 de T. gondii fue de 7,8 pg/mL y 31,3 pg/mL, respectivamente. Para caracterizar este enfoque diagnóstico, 164 pacientes hospitalizados infectados por el VIH con síntomas neurológicos compatibles con ET se analizaron para 1) serología de T. gondii (121/147, muestras positivas/muestras totales analizadas), 2) qPCR en líquido cefalorraquídeo (11/41), 3) qPCR en sangre (10/112) y 4) GRA1 urinario (30/164) y SAG1 (12/164). GRA1 parece ser superior a SAG1 para la detección de antígenos en la ET en orina. Cincuenta y un personas infectadas con VIH, T. gondii seropositivas pero asintomáticas, todas resultaron negativas por transferencia Western de nanopartículas y qPCR en sangre, lo que sugiere que la prueba tiene buena especificidad para la ET tanto para GRA1 como para SAG1. En un subgrupo de 44 pacientes, se analizaron muestras de orina con espectrometría de masas PRM para detectar la presencia de antígenos de T. gondii. El PRM identificó antígenos en ocho muestras, seis de las cuales coincidían con el diagnóstico de orina.

Los autores concluyeron que sus resultados demuestran el potencial de la tecnología de nanopartículas para una prueba de diagnóstico no invasiva para la ET y que GRA1 es un objetivo prometedor para el diagnóstico basado en antígenos para la ET. El estudio fue publicado el 2 de marzo de 2021 en la revista PLOS Neglected Tropical Diseases.

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Universidad de Illinois Chicago
Applied Biosciences