Presentan alternativa rápida para pruebas de seguridad estándar

Los lentivirus son un tipo de retrovirus utilizados comúnmente por los científicos para introducir nuevos genes en las células T receptoras de antígeno, quiméricas, terapéuticas (células CAR-T), que se introducen de nuevo en los pacientes para combatir el cáncer.

 

Estos virus son diseñados típicamente para ser seguros, pero si se siguen replicando activamente en un paciente tienen el potencial de causar cáncer. Las iteraciones tempranas de los vectores retrovirales de primera generación se asociaron con la leucemia, pero este riesgo se ha aproximado a cero mediante el uso de lentivirus de tercera generación.

 

Los científicos de la facultad de medicina de la Universidad de Stanford (Palo Alto, CA, EUA) desarrollaron una prueba rápida para buscar un marcador de la envoltura viral en una muestra de células diseñadas que no debería estar allí si no hay replicación viral presente. Una ventaja es que esto se puede hacer en el laboratorio cuando los cultivos están recién preparados con algunos reactivos moleculares y una persona que trabaje durante un par de horas. El procedimiento estándar establecido por la Administración de Alimentos y Medicamentos de los Estados Unidos (FDA, Silver Springs, MD, EUA)  requiere esperar de 3 a 4 semanas para verificar si los cultivos virales crecen y las muestras deben congelarse y enviarse a un sitio de análisis externo.

 

Los investigadores describieron el desarrollo y calificación de un ensayo molecular basado en la detección de secuencias de genes de la envoltura (glicoproteína G del virus de la estomatitis vesicular [VSV-G]) para la replicación de lentivirus competentes (RCL) de acuerdo con las directrices para la Publicación de los Experimentos de reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real (qRT-PCR) (MIQE). Los resultados demuestran la sensibilidad, linealidad, especificidad y reproducibilidad de la detección de secuencias de la VSV-G, con una baja tasa de falsos positivos. Estos procedimientos se usan actualmente en las investigaciones clínicas de fase 1. Se cuantificó el ADN usando un Nanofotómetro Implen (Múnich, Alemania) y se registraron los valores de A260/A280 y de A260/A230 como una representación de la pureza de la muestra.

 

David L. DiGiusto, PhD, autor principal del estudio, dijo: “Mucha gente evita esta tecnología para el análisis rápido porque tiene este potencial para dar resultados falsos positivos, pero creo que hemos demostrado que es muy posible tener una alta sensibilidad y exactitud con esta prueba. Este método es bastante sencillo, y cualquier laboratorio que utilice vectores lentivirales debería pensar en usarlo en sus productos celulares lentivirales transducidos para documentar la falta de virus detectables con posibilidad de replicación”. El estudio fue publicado el 21 de setiembre de 2017 en la revista Molecular Therapy--Methods & Clinical Development.