Comparan análisis moleculares para la detección de la ERM en la LLA-B

Se ha demostrado la importancia pronóstica de la enfermedad residual mínima (ERM) en niños con leucemia linfoide aguda (LLA).

Se utilizan ampliamente métodos basados en la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR), para reordenamientos de inmunoglobulina clonal o gen receptor de células T (Ig/TCR) y para transcripciones de fusión y para la medición de enfermedad residual mínima (ERM) en pacientes con leucemia linfoide aguda precursora de células B (B-LLA).

Un gran equipo de oncólogos hematológicos del Hospital Memorial Chang-Gung (Taipéi, Taiwán) y sus colegas recolectaron muestras de médula ósea en el momento del diagnóstico y en diferentes momentos después del tratamiento de pacientes con LLA-B. Las células mononucleares (CMN) de médula ósea (MO) de diagnóstico se enriquecieron inmediatamente mediante centrifugación en gradiente de densidad con Ficoll-Hypaque, se sometieron a extracción de ARN mediante el uso de reactivo Trizol (Invitrogen Corporation, Carlsbad, CA, EUA) y luego fueron seguidas mediante ensayos de RT-PCR. para detectar las principales transcripciones de fusión para el diagnóstico y la estratificación del riesgo.

La ERM de muestras de médula ósea de 165 pacientes que portaban las tres principales transcripciones de fusión, incluidas 74 BCR-ABL1, 54 ETV6-RUNX1 y 37 TCF3-PBX1, se analizaron mediante el uso de dos métodos basados en qPCR. Se sintetizó ADN complementario (ADNc) utilizando el kit de transcriptasa inversa Invitrogen Superscript II Rnase H2 con hexámero aleatorio. El ensayo RT-qPCR con TaqMan para la medición de las tres principales transcripciones de fusión se realizó con el gen ABL1 como control interno en el ABI 7700 (antes de 2009) o 7900 (después de 2009) (Applied Biosystems, Foster City, CA, EUA). Se utilizaron cebadores de consenso BIOMED-2 para el análisis de heterodúplex con el fin de amplificar el locus de Ig o TCR en el ADNg.

El coeficiente de correlación de ambos métodos fue bueno para TCF3-PBX1 y BCR-ABL1 (LLA y moderado para ETV6-RUNX1). La concordancia fue perfecta para TCF3-PBX1 LLA (97,2%), sustancialmente concordante para ETV6-RUNX1 LLA (87,1%) y solo moderada para BCR-ABL1 LLA (70,6%). La ERM discordante, positiva para un solo método con una diferencia superior a un log, se encontró en cuatro de 93 muestras (4,3%) con ETV6-RUNX1, 31 de 245 muestras (12,7%) con BCR-ABL1 y ninguna de TCF3 -PBX1 LLA. Ninguno de los ocho pacientes no trasplantados con BCR-ABL1-ERM (+)/Ig/TCR-ERM (-) con una mediana de seguimiento de 73,5 meses tuvo recaídas hematológicas.

Los autores concluyeron que sus resultados demostraron que cada transcripción de fusión tenía una tendencia de uso específico de VH. La excelente concordancia de ERM entre los dos métodos basados en qPCR en TCF3-PBX1 LLA indicó que la RT-qPCR es el método más rentable para TCF3-PBX1 LLA, mientras que Ig/TCR-qPCR es un método más confiable para guiar la terapia adaptada a la ERM en LLA BCR-ABL1. El estudio fue publicado el 25 de julio de 2021 en la revista The Journal of Molecular Diagnostics.

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Chang-Gung Memorial Hospital