Evalúan citometría de flujo para recuentos diferenciales en cordón umbilical

Se estudió el potencial de la citometría de flujo para analizar y reportar los diferenciales de leucocitos en sangre de cordón umbilical, con el fin de que pueda ser usado para la obtención de células madre hematopoyéticas.

Actualmente, el método de referencia para los leucocitos es el recuento microscópico, manual, pero los estándares internacionales recomiendan que la sangre del donante potencial sea analizada para determinar el número de células nucleadas totales, el recuento de eritrocitos nucleados totales, el número total de células CD34, la viabilidad o potencia medida por las células CD34 viables. También se recomiendan los análisis de unidades formadoras de colonias, los cultivos microbianos y finalmente un recuento sanguíneo completo con diferencial de los leucocitos.

Los hematólogos en el Centro Hospitalario Universitario (CHU, Rennes, Francia) analizaron 161 sangres de cordón, entre noviembre de 2010 y febrero de 2011. Se determinaron los recuentos diferenciales de leucocitos para cada muestra, usando un contador de células, un método manual, y la citometría de flujo mediante un cóctel de anticuerpos. El recuento diferencial de los leucocitos incluye el recuento de neutrófilos, eosinófilos, basófilos, linfocitos, monocitos, granulocitos inmaduros y blastos celulares.

Todas las muestras fueron analizadas en la plataforma HematoFlow (Beckman Coulter, Miami, FL, EUA) en un plazo máximo de 12 horas después de la recolección. Esta plataforma está construida alrededor del preparador de células FP1000 de Beckman Coulter, junto con su citómetro de flujo de cinco colores FC500. El cóctel de anticuerpos utilizado fue otro producto de Beckman Coulter, llamado CytoDiff.

Se obtuvo una buena correlación para los neutrófilos, linfocitos y granulocitos inmaduros, cuando se comparó el método manual con la citometría de flujo, pero fue más débil para los eosinófilos e, inclusive, menor para los monocitos y basófilos. El método de citometría de flujo, empleado, permitió la identificación de 12 subtipos de células (neutrófilos, eosinófilos, basófilos, linfocitos B, linfocitos T, no citotóxicos y linfocitos T citotóxicos/linfocitos Natural Killer (NK), monocitos negativos para CD16 y monocitos positivos para CD16, granulocitos inmaduros, citoblastos B, citoblastos T y citoblastos no-B-no-T, con un único panel de anticuerpos y un volumen mínimo de 50 µL de sangre.

Los autores concluyeron que el diferencial de flujo tiene algunos inconvenientes tales como el costo del reactivo CytoDiff, pero esto puede ser equilibrado por la reducción en el tiempo técnico necesario para el recuento manual y el uso de un producto estandarizado. La citometría de flujo se presenta como una técnica completamente adaptada para proporcionar un diferencial de leucocitos en una muestra de sangre del cordón umbilical. Los recuentos de subconjuntos de células adicionales ofrecidos en el mismo procesamiento, probablemente serán explotados en un futuro próximo para caracterizar mejor el potencial de injerto. El estudio fue publicado en la edición de marzo de 2013 en la revista International Journal of Laboratory Hematology.

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